- ¥998 - 3650
- 康朗生物
- CAT#: KL12080
- 中国/上海
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
R5421 Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
R5421
R5421 Chemically Competent Cell 产品说明书产品规格 （CAT#: KL12080）
R5421 Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
基因型
MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64
产品说明
R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株，在文献中也称为CY162，MATα型，多用于K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中，也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker为：ura3，leu2，该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中国正常生长，在含有5-10mM KCl的培养基中生长缓慢，当培养基中KCl浓度低于0.5mM，R5421（CY162）细胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态，步骤如下：Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min，快速插入冰中，静置3 min，再次放95℃水浴或金属浴3 min，快速插入冰中，静置3 min以上。
2. 取100 µl冰上融化的R5421感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg，Carrier DNA10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. R5421酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。
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文献和实验指在 DNA双链之一部分，由与其互补的 RNA与之结合而产生的核酸分子的环形结构。为与由 DNA而成的 D环相对应的名称。因 RNA、 DNA杂合的双链比 DNA双链稳定，所以在比 DNA的双链开始分开时稍高的温度下， RNA分子仍与 DNA的互补部分形成稳定的双链。即如图 A所示， RNA与具同一性质的 DNA部分置换，形成 R环。在基因 DNA具有外显子 -内含子（ Exons－ introns）结构时，则如图 B所示只在内含子部分的 DNA以双链环残存着，产生与 Excons数相应
R因子 R factor 抗药因子或抗多药剂因子的简称。 R是 resista- nce一词的首字。它是一种细胞质性的质粒，这种质粒具有使寄主菌对链霉素、氯霉素、四环素等抗菌素或磺胺剂产生抗药性的基因群，和 F因子一样，通过接台进行转移，获得该因子的细菌同时获得对多种药剂的抗性，因而给治疗带来很大麻烦。 R因子的实体为环状双链 DNA分子。自从 50年代后半期在日本发现 R因子以来，渡道力等（ 1969）曾对此进行了研究。其它国家也分离了许多 R因子。现在已知有各式
r选择 r-selection 由 R.H.MacArthur和 E.O.wilson（ 1967）创造的术语． r选择与 K选择是对立的．内部的自然增加率 r有利于自然的增大只限于种群密度远远低于环境容纳能力的时候，在种群维持接近于环境容纳能力的高密度水平时．而高效率地利用有限的资源毋宁说选择会有利于少数后代确保其存活的基因型。基于这一认识，根据 Logistic曲线．前者特命名为 r选择，后者命名为 K选择． r选择是指对在一个新的栖息场所（如岛屿）定居过程中，或对不断变动其不安
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