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负20度
- 保质期:
2年
- 英文名:
pUC19
- 库存:
100
- 供应商:
kelei-bio
- 规格:
20μl
启动子: Lac/lac
复制子: ColE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体;克隆质粒
质粒大小: 2686bp
质粒标签: LacZ
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
5'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
3'测序引物: M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
备注: 蓝白斑筛选
质粒简介
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ,是最常用的质粒载体,其结构组成紧凑,几乎不含多余的 DNA片段,GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来,其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 。这两个质粒的结构几乎是完全一样的,只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因,因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列,在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后,可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组 质粒。pUC18、pUC19载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。由于在lacZ领域中含有多克隆位点,因此在以lacZ缺欠细胞作为宿主 (如:JM109等) 进行转化后,在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上进行培养时,可以很容易地通过蓝白筛选,判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因,对插入载体中的DNA片段进行测序等。进行DNA测序时,可以方便地使用M13系列的通用引物。
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文献和实验相关专题 那些实验室常用的克隆载体 pUC18 和 pUC19质粒图谱 pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ,是最常用的质粒载体,其结构组成紧凑,几乎不含多余的 DNA 片段,GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来,其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。 这两个质粒的结构几乎是完全
1、质粒的概念 质粒(Plasmid)是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子,能够独立于宿主染色体进行自我复制,并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因(如抗生素抗性基因)。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型,如用于保存序列信息的克隆质粒(如:pUC 系列质粒),用于表达蛋白的质粒(如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒),用于基因编辑的质粒(如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
) 克隆困难怎么办? 对于大片段载体构建实验而言,难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点,从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略,具体方案如下: ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略,降低连接难度; ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增,所以需要从源头保证实验成功率,即保证模板完整度,在扩增前确保模板未发生降解;其次优化 PCR 体系,比如选择长片段专用 PCR 酶,通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等; ③避免高拷贝载体(如 pUC
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