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- 保质期：
2年
- 英文名：
pCOLADuet-1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCOLADuet-1大肠双表达质粒
别称: pCOLADuet-1
质粒属性
质粒简介
pCOLADuet-1 is designed for the coexpression of two target genes from a single plasmid. The vector encodes two multiple cloning sites (MCS) each of which is preceded by a T7 promoter, lac operator, and ribosome binding site (rbs). MCS-1 encodes the six-amino acid His•Tag sequence for the creation of a N-terminal fusion and MCS2 encodes the 15 amino acid S•Tag™ peptide after the last restriction site for the creation of a C-terminal fusion if desired. Genes inserted into MCS-1 can be sequenced using the ACYCDuetUP1 Primer and DuetDOWN1 Primer. Genes inserted into MCS-2 can be sequenced using the DuetUP2 Primer and T7 Terminator Primer. The vector has the COLA replicon from ColA(1) and the kanamycin resistance gene. This vector can be transformed into the same cell with plasmids containing compatible origins of replication and drug resistance genes for coexpression of up to 8 target genes.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3719 bp ds-DNA circular SYN 26-8-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3719)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-26 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3719
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 3..27
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 83..100
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
promoter 214..232
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 233..257
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 366..410
/codon_start=1
/product="affinity and epitope tag derived from pancreatic
ribonuclease A"
/note="S-Tag"
/translation="KETAAAKFERQHMDS"
terminator 462..509
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(739..1554)
/codon_start=1
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
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promoter complement(1555..1646)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(1664..2299)
/direction=LEFT
/note="ColA ori"
/note="Plasmids containing the ColA origin of replication
can be propagated in E. coli cells that contain additional
plasmids with compatible origins."
CDS complement(2497..3579)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
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YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(3580..3657)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
/note="
"
promoter 3703..2
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
ORIGIN
1 ggggaattgt gagcggataa caattcccct gtagaaataa ttttgtttaa ctttaataag
61 gagatatacc atgggcagca gccatcacca tcatcaccac agccaggatc cgaattcgag
121 ctcggcgcgc ctgcaggtcg acaagcttgc ggccgcataa tgcttaagtc gaacagaaag
181 taatcgtatt gtacacggcc gcataatcga aattaatacg actcactata ggggaattgt
241 gagcggataa caattcccca tcttagtata ttagttaagt ataagaagga gatatacata
301 tggcagatct caattggata tcggccggcc acgcgatcgc tgacgtcggt accctcgagt
361 ctggtaaaga aaccgctgct gcgaaatttg aacgccagca catggactcg tctactagcg
421 cagcttaatt aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg
481 cctctaaacg ggtcttgagg ggttttttgc tgaaacctca ggcatttgag aagcacacgg
541 tcacactgct tccggtagtc aataaaccgg taaaccagca atagacataa gcggctattt
601 aacgaccctg ccctgaaccg acgacaagct gacgaccggg tctccgcaag tggcactttt
661 cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat
721 ccgctcatga attaattctt agaaaaactc atcgagcatc aaatgaaact gcaatttatt
781 catatcagga ttatcaatac catatttttg aaaaagccgt ttctgtaatg aaggagaaaa
841 ctcaccgagg cagttccata ggatggcaag atcctggtat cggtctgcga ttccgactcg
901 tccaacatca atacaaccta ttaatttccc ctcgtcaaaa ataaggttat caagtgagaa
961 atcaccatga gtgacgactg aatccggtga gaatggcaaa agtttatgca tttctttcca
1021 gacttgttca acaggccagc cattacgctc gtcatcaaaa tcactcgcat caaccaaacc
1081 gttattcatt cgtgattgcg cctgagcgag acgaaatacg cggtcgctgt taaaaggaca
1141 attacaaaca ggaatcgaat gcaaccggcg caggaacact gccagcgcat caacaatatt
1201 ttcacctgaa tcaggatatt cttctaatac ctggaatgct gttttcccgg ggatcgcagt
1261 ggtgagtaac catgcatcat caggagtacg gataaaatgc ttgatggtcg gaagaggcat
1321 aaattccgtc agccagttta gtctgaccat ctcatctgta acatcattgg caacgctacc
1381 tttgccatgt ttcagaaaca actctggcgc atcgggcttc ccatacaatc gatagattgt
1441 cgcacctgat tgcccgacat tatcgcgagc ccatttatac ccatataaat cagcatccat
1501 gttggaattt aatcgcggcc tagagcaaga cgtttcccgt tgaatatggc tcatactctt
1561 cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt
1621 tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg catgctagcg cagaaacgtc ctagaagatg
1681 ccaggaggat acttagcaga gagacaataa ggccggagcg aagccgtttt tccataggct
1741 ccgcccccct gacgaacatc acgaaatctg acgctcaaat cagtggtggc gaaacccgac
1801 aggactataa agataccagg cgtttccccc tgatggctcc ctcttgcgct ctcctgttcc
1861 cgtcctgcgg cgtccgtgtt gtggtggagg ctttacccaa atcaccacgt cccgttccgt
1921 gtagacagtt cgctccaagc tgggctgtgt gcaagaaccc cccgttcagc ccgactgctg
1981 cgccttatcc ggtaactatc atcttgagtc caacccggaa agacacgaca aaacgccact
2041 ggcagcagcc attggtaact gagaattagt ggatttagat atcgagagtc ttgaagtggt
2101 ggcctaacag aggctacact gaaaggacag tatttggtat ctgcgctcca ctaaagccag
2161 ttaccaggtt aagcagttcc ccaactgact taaccttcga tcaaaccgcc tccccaggcg
2221 gttttttcgt ttacagagca ggagattacg acgatcgtaa aaggatctca agaagatcct
2281 ttacggattc ccgacaccat cactctagat ttcagtgcaa tttatctctt caaatgtagc
2341 acctgaagtc agccccatac gatataagtt gtaattctca tgttagtcat gccccgcgcc
2401 caccggaagg agctgactgg gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgaga tcccggtgcc
2461 taatgagtga gctaacttac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga
2521 aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
2581 attgggcgcc agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt
2641 caccgcctgg ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg
2701 aaaatcctgt ttgatggtgg ttaacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc
2761 gtatcccact accgagatgt ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat
2821 tgcgcccagc gccatctgat cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt
2881 cagcatttgc atggtttgtt gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc
2941 tatcggctga atttgattgc gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc
3001 cgagacagaa cttaatgggc ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag
3061 atgctccacg cccagtcgcg taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt
3121 ctggtcagag acatcaagaa ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat
3181 ggcatcctgg tcatccagcg gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag
3241 attgtgcacc gccgctttac aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac
3301 gctggcaccc agttgatcgg cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg
3361 cagggccaga ctggaggtgg caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg
3421 tgccacgcgg ttgggaatgt aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt
3481 tttcgcagaa acgtggctgg cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc
3541 ggcatactct gcgacatcgt ataacgttac tggtttcaca ttcaccaccc tgaattgact
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3661 gatctcgacg ctctccctta tgcgactcct gcattaggaa attaatacga ctcactata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCOLADuet-1大肠双表达质粒
别称: pCOLADuet-1
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | ColA |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；双表达框质粒 |
| 质粒大小: | 3719bp |
| 质粒标签: | N-6×His,C-S |
| 原核抗性: | Kan |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | ACYCDuetUP1：GGATCTCGACGCTCTCCCT DuetUP2:TTGTACACGGCCGCATAATC |
| 3'测序引物: | DuetDOWN1:GATTAGCGGCCGTGTACAA T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
| 备注: | 同时表达两个外源蛋白 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 多框空载 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
pCOLADuet-1 is designed for the coexpression of two target genes from a single plasmid. The vector encodes two multiple cloning sites (MCS) each of which is preceded by a T7 promoter, lac operator, and ribosome binding site (rbs). MCS-1 encodes the six-amino acid His•Tag sequence for the creation of a N-terminal fusion and MCS2 encodes the 15 amino acid S•Tag™ peptide after the last restriction site for the creation of a C-terminal fusion if desired. Genes inserted into MCS-1 can be sequenced using the ACYCDuetUP1 Primer and DuetDOWN1 Primer. Genes inserted into MCS-2 can be sequenced using the DuetUP2 Primer and T7 Terminator Primer. The vector has the COLA replicon from ColA(1) and the kanamycin resistance gene. This vector can be transformed into the same cell with plasmids containing compatible origins of replication and drug resistance genes for coexpression of up to 8 target genes.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3719 bp ds-DNA circular SYN 26-8-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3719)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-26 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3719
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/mol_type="other DNA"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
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ribonuclease A"
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/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(739..1554)
/codon_start=1
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
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promoter complement(1555..1646)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
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/direction=LEFT
/note="ColA ori"
/note="Plasmids containing the ColA origin of replication
can be propagated in E. coli cells that contain additional
plasmids with compatible origins."
CDS complement(2497..3579)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(3580..3657)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
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"
promoter 3703..2
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
ORIGIN
1 ggggaattgt gagcggataa caattcccct gtagaaataa ttttgtttaa ctttaataag
61 gagatatacc atgggcagca gccatcacca tcatcaccac agccaggatc cgaattcgag
121 ctcggcgcgc ctgcaggtcg acaagcttgc ggccgcataa tgcttaagtc gaacagaaag
181 taatcgtatt gtacacggcc gcataatcga aattaatacg actcactata ggggaattgt
241 gagcggataa caattcccca tcttagtata ttagttaagt ataagaagga gatatacata
301 tggcagatct caattggata tcggccggcc acgcgatcgc tgacgtcggt accctcgagt
361 ctggtaaaga aaccgctgct gcgaaatttg aacgccagca catggactcg tctactagcg
421 cagcttaatt aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg
481 cctctaaacg ggtcttgagg ggttttttgc tgaaacctca ggcatttgag aagcacacgg
541 tcacactgct tccggtagtc aataaaccgg taaaccagca atagacataa gcggctattt
601 aacgaccctg ccctgaaccg acgacaagct gacgaccggg tctccgcaag tggcactttt
661 cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat
721 ccgctcatga attaattctt agaaaaactc atcgagcatc aaatgaaact gcaatttatt
781 catatcagga ttatcaatac catatttttg aaaaagccgt ttctgtaatg aaggagaaaa
841 ctcaccgagg cagttccata ggatggcaag atcctggtat cggtctgcga ttccgactcg
901 tccaacatca atacaaccta ttaatttccc ctcgtcaaaa ataaggttat caagtgagaa
961 atcaccatga gtgacgactg aatccggtga gaatggcaaa agtttatgca tttctttcca
1021 gacttgttca acaggccagc cattacgctc gtcatcaaaa tcactcgcat caaccaaacc
1081 gttattcatt cgtgattgcg cctgagcgag acgaaatacg cggtcgctgt taaaaggaca
1141 attacaaaca ggaatcgaat gcaaccggcg caggaacact gccagcgcat caacaatatt
1201 ttcacctgaa tcaggatatt cttctaatac ctggaatgct gttttcccgg ggatcgcagt
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1321 aaattccgtc agccagttta gtctgaccat ctcatctgta acatcattgg caacgctacc
1381 tttgccatgt ttcagaaaca actctggcgc atcgggcttc ccatacaatc gatagattgt
1441 cgcacctgat tgcccgacat tatcgcgagc ccatttatac ccatataaat cagcatccat
1501 gttggaattt aatcgcggcc tagagcaaga cgtttcccgt tgaatatggc tcatactctt
1561 cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt
1621 tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg catgctagcg cagaaacgtc ctagaagatg
1681 ccaggaggat acttagcaga gagacaataa ggccggagcg aagccgtttt tccataggct
1741 ccgcccccct gacgaacatc acgaaatctg acgctcaaat cagtggtggc gaaacccgac
1801 aggactataa agataccagg cgtttccccc tgatggctcc ctcttgcgct ctcctgttcc
1861 cgtcctgcgg cgtccgtgtt gtggtggagg ctttacccaa atcaccacgt cccgttccgt
1921 gtagacagtt cgctccaagc tgggctgtgt gcaagaaccc cccgttcagc ccgactgctg
1981 cgccttatcc ggtaactatc atcttgagtc caacccggaa agacacgaca aaacgccact
2041 ggcagcagcc attggtaact gagaattagt ggatttagat atcgagagtc ttgaagtggt
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2221 gttttttcgt ttacagagca ggagattacg acgatcgtaa aaggatctca agaagatcct
2281 ttacggattc ccgacaccat cactctagat ttcagtgcaa tttatctctt caaatgtagc
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2401 caccggaagg agctgactgg gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgaga tcccggtgcc
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2521 aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
2581 attgggcgcc agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt
2641 caccgcctgg ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg
2701 aaaatcctgt ttgatggtgg ttaacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc
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2821 tgcgcccagc gccatctgat cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt
2881 cagcatttgc atggtttgtt gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc
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3181 ggcatcctgg tcatccagcg gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag
3241 attgtgcacc gccgctttac aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0949/pDG148-StuI枯草胞内质粒 |
| P1353/pSG1729枯草胞内质粒 |
| P0846/pDG364枯草胞内质粒 |
| P1570/pDG1730枯草胞内质粒 |
| P1421/pIEFBPR枯草分泌质粒 |
| P1790/pDGIEF枯草整合分泌质粒 |
| P1811/pHCMC04枯草木糖诱导质粒 |
| P2219/pGFP4412枯草荧光质粒 |
| P4274/pHIS1525巨大芽孢杆菌表达质粒 |
| P1304/pDGICZ枯草编辑质粒 |
| P2504/pJMP1枯草编辑质粒 |
| P3072/pJMP2枯草编辑质粒 |
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文献和实验相关实验
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
，TaKaRa，有木有；pGM-T，天根，有木有；一些表达载体，使用最广泛的，pET 系列，Novagen 公司（默克）的；有双 MCS 的 Duet 系列载体，Novagen 的；毕赤酵母表达质粒 pPIC3.5k，pPIC9k，pPICZA，pPICZaA 等等，都是 invitrogen 的；另外一些 pYES 酿酒酵母表达系统，也是 invitrogen 的，因此知道常见的质粒是哪个公司的，去他们公司网站上肯定可以找到该质粒的相关信息。在他们公司主页搜索栏直接搜索质粒名称，得到质粒序列，图谱什么的
实验简介噬藻体是水体中常见的浮游病毒，具有控制有害藻华、调节水生态结构、以纳米尺度驱动全球生物地球化学循环、特别是碳循环的一类不可忽视的战略生物资源；异弯藻是水体中的常见藻类，在适宜的温度下会大量生长，曾在大连湾、胶州湾等曾多次形成赤潮，对异弯藻计数是水质检测中常见的检测项目。异弯藻富含叶绿素，叶绿素在蓝光激发下有红色自发荧光；检测水体中大肠杆菌的含量，常作为水体污染指数的衡量标准。本实验用核酸染料 SYBR green I 染色，借助 CytoFLEX 流式细胞仪对噬藻体、大肠杆菌、异弯藻
pCOLADuet-1大肠双表达质粒
￥100 - 1000
