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- KL-J-0079
- 2025年07月15日
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-20度
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300UL
基因型： F- glnV44 recA13 mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 xyl-5 leu mtl-1 基本信息： 抗性：Str 培养基：LB 菌株类别：大肠杆菌 培养条件：37℃，有氧，LB 质粒转化：42℃热激 保存方式：20%甘油，-20℃ 基本应用：用于基因克隆 备注： 菌株简介： Stbl3菌株来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性；不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。 Stbl3能够有效扩增慢病毒载体上的重复序列DNA，是进行慢病毒载体构建时的高效克隆菌株。对Stbl3使用LB，在37℃有氧的环境下培养，然后使用20%的甘油保藏菌种，42℃热激处理可将质粒成功转入Stbl3中。
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文献和实验相关实验
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克隆菌
。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。4. 最后，将酶切后产物转化入大肠杆菌，通过涂板挑取单克隆菌落后，摇菌测序，这样就可以得到突变基因的质粒啦。
。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。4. 最后，将酶切后产物转化入大肠杆菌，通过涂板挑取单克隆菌落后，摇菌测序，这样就可以得到突变基因的质粒啦。
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Stbl3大肠杆菌克隆菌
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