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- 2025年07月07日
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300UL
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文献和实验一步实现单拷贝到高拷贝的转换－－Copy Control克隆技术（附图）
这个载体含有两个复制起始位点（如图1）：单拷贝的大肠杆菌F-因子复制子，和诱导型的高拷贝oriV。 OriV的启动，需要trfA基因产物，trfA基因既不在pCC1 Vector上，也不在其他常规用来克隆的大肠杆菌菌株中，这个基因由CopyControl 的第二个重要元件—— TransforMax EPI300 E.coli菌株提供。 （二）TransforMax EPI300 E.coli. 这是一个工程菌株，含有受诱导启动子严谨控制的trf A基因，在诱导
一步实现单拷贝到高拷贝的转换---CopyControl克隆技术
统可以用来构建PCR 克隆 ，对于BAC，fosmid文库等大型质粒格外有用。 CopyControl 克隆 系统有两个重要的成分： 1．CopyControl pCC1 Vector. 这个载体含有两个复制起始位点（如图1）：单拷贝的大肠杆菌F-因子复制子，和诱导型的高拷贝oriV。 OriV的启动，需要trfA基因产物，trfA基因既不在pCC1 Vector上，也不在其他常规用来 克隆 的大肠杆菌菌株中，这个基因由CopyControl 的第二个重要元件——
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克隆菌
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