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文献和实验Integration of Genes into the Chromosome of Agrobacterium tumefaciens C58
of multiple antibiotics during bacterial growth. This chapter describes in detail a method to integrate a gene of interest into the pgl /picA locus of the Agrobacterium tumefaciens C58 chromosome. The integrated gene is stably maintained as single copy
的转化方法 1 根癌农杆菌介导转化法 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌。它能在自然条件下感染大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤(crown gall tumor)。根癌农杆菌细胞中含有Ti 质粒(tumor-inducing plasmid,瘤诱导质粒)。在Ti 质粒上有一段T-DNA(T-DNA region),即转移-DNA(transfer-DNA),又称为T区(T region)。根癌农杆菌通过侵染
质粒分为三大类,感染的植物诱导合成这些有机碱,但不能利用它们,其分解酶基因在Ti质粒上,分解产物为氨基酸和糖类,供根癌农杆菌使用作为氮源及碳源。 2.T-DNA 的整合机制: T-DNA 的详细整合机制尚不清楚,但有几个环节是明确的: T-DNA 切除由Vir区编码的特异性内切酶完成,分别在LB和RB的第三个碱基和第四个碱基之间产生缺口,并形成单链T-DNA 。 T-DNA 的LB和RB在整合中的作用是不对称的,RB顺序与整合有关,而LB无关。 T-DNA 的整合可以是单拷贝
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