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文献和实验【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择!(接原原核表达研究者关心的10个问题贴)
性不利,容易出现质粒丢失、表达水平不稳定、菌株退化乃至发生污染等情况。 我们建议: 1、长期存放菌株和pET重组子应该存在甘油-70℃保种。但是要注意高浓度甘油(>10%)会导致质粒不稳定。请尽量保持甘油浓度8%。(15%浓度的甘油保种液和新鲜菌液1:1就行)2、重组质粒不宜长期保存于表达菌株(带DE3的大肠杆菌)中,请尽量使用带有recA endA突变的克隆菌株(比如C600,DH5a)进行质粒抽提和保存质粒。表达型的菌株提质粒经常会有质量不高或者背景的问题。特别是大量抽提。
枯草芽孢杆菌,学名Bacillus subtilis,是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同,枯草芽孢杆菌没有外层膜,分泌的蛋白能直接释放到培养基中,是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统,它究竟强在哪些方面呢?且让AtaGenix为您一一道来。 1 安全可靠 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的,收录于FDA的GRAS菌中,欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品
-MBP融合了麦芽糖蛋白,可用作对照载体和克隆载体(将目的基因克隆到pTWIN-MBP1 NcoI-SacI酶切位点之间,会在蛋白产物的N-端增加3个氨基酸,C-端增加23个氨基酸.) IMPACT系统利用的是T7启动子进行转录,在菌株中T7RNA聚合酶受到乳糖操纵子的调控.这一表达原理与Novagen的pET系列是一样的,NEB有提供自己的表达菌株ER2566,它也是lon和ompT蛋白酶缺陷型的,这点与BL21(DE3)也相同.它的基因表型如下:F�λ�fhuA2
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