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RNA干扰|腺病毒|腺病毒包装

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供应商信息

和元生物技术(上海)股份有限公司
商家诚信度:
成立时间:2013
入驻丁香通年限:5年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:63%
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产品详情

简介: 根据客户提供的目的基因,针对该基因设计3个siRNA靶点,再将这些靶点构建到腺病毒载体,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。
提供商: 和元上海
服务名称: 腺病毒介导的RNA干扰实验
地区: 上海

RNA干扰|腺病毒|腺病毒包装


服务简介:

        RNA干扰(RNA interference,RNAi)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象,当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)时,该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象。外源dsRNA 进入细胞后产生的小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)的反义链和多种核酸酶形成了沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC),RISC具有结合和切割mRNA的作用而介导RNA干扰的过程。
       和元上海腺病毒具有宿主范围广,免疫原性强,基因容量大,不与基因组整合,瞬间表达等特点,目前较为成熟的载体系统有非复制型(如AdMax)和复制型(又叫溶瘤腺病毒)两种。腺病毒适于在短时间内进行基因高表达的实验。
        和元上海根据客户提供的目的基因,针对该基因设计3个siRNA靶点,再将这些靶点构建到腺病毒载体,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。


和元上海服务流程:


和元上海服务优势:

对分裂期细胞和非分裂期细胞均有感染作用
表达迅速高效
包装容量大,最长重组片段可达4.5k
多种载体可选


和元上海可供选择的载体:

载体名称 载体特点 载体启动子
pDKD-CMV-EGFP-U6-MCS 带EGFP荧光蛋白 广泛表达的强启动子
pDKD-Ubc-EGFP-U6-MCS 带EGFP荧光蛋白 泛素启动子,可在干细胞、原代细胞核离体神经元中表达
pDKD-CMV-puro-U6-MCS 带puro抗性 广泛表达的强启动子
pDKD-CMV-mcherry-U6-MCS 带红色荧光蛋白 广泛表达的强启动子
pAdeno-U6-Mir30-CMV-EGFP - 可用于过表达mirRNA shRNA

腺病毒相关技术服务:
      腺病毒|基因组编辑
      腺病毒|基因表达
      腺病毒|RNA干扰
      腺病毒|microRNA抑制
      腺病毒|microRNA表达

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服务简介腺病毒是一种无包膜的球型结构的病毒,遗传物质为线型双股DNA形式。腺病毒的特点:(1)感染范围广对人致病性低;(2)对增殖和非增殖细胞均具有感染性;(3)能有效进行增殖;(4)病毒滴度高;(5)不整合到染色体中,无插入致突变性;(6)外源基因装载容量大。由于腺病毒的这些特点使其广泛地应用于体外基因转导、体内接种疫苗、和基因治疗等各个领域。吉满生物采用的AdMax重组腺病毒系统通过Cre/loxP 获得重组病毒,这个过程发生在HEK293细胞中,从而避免在细菌中重组。将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒基因组的包装质粒共转染包装细胞,借助Cre/loxP系统的作用实现重组产生腺病毒。该系统有多种优势,包括克服了传统共转染系统重组效率低的缺点;也避免了细菌重组中的种种不确定性;操作简单,重组效率高,实现了快速高效的腺病毒包装。另外,研究者还可以根据不同的实验需求构建相应的腺病毒穿梭载体。技术特点※复制缺陷型腺病毒颗粒,对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用;※无需任何转染试剂,操作简单;※适用于在难转染的细胞中进行RNA干扰、过表达特定基因或过表达特定microRNA研究和In vivo 实验;※不适用于感染腺病毒以后细胞发生死亡和分化的敏感细胞和需要长期稳定表达目的基因的实验。其它相关服务: 基因克隆 慢病毒、腺相关病毒 CRISPR/Cas9服务 报告基因专题
病毒类技术服务基因治疗是向靶细胞或组织中引入外源基因DNA或RNA片段,上调治疗基因的表达水平或者关闭/抑制异常表达的基因,从而达到治疗的目的。基因治疗成功的关键是选择合适的载体系统,理想的基因治疗载体应具备:靶向特异性;高度稳定、易制备、可浓缩和纯化;无毒性;有利于基因高效转移和长期表达;容量大,易人工合成,缺乏自动复制载体自身的能力。由于病毒基因组结构简单、分子背景比较清楚、易于改造和操作、感染效率高、有较高靶细胞特异性,因此,病毒类基因治疗载体已经从基础研究走向临床医学应用领域,得到了广泛的应用和发展。世翱上海主要提供以慢病毒,腺病毒为主的应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。 慢病毒包装纯化服务慢病毒(Lentivirus, LV)属于逆转录病毒科,为RNA病毒。经过改造的慢病毒作为外源基因载体,具有其独特的特点和优势。慢病毒载体作为一种特殊的逆转录病毒载体,具有可感染分裂细胞及非分裂细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点,已成为当前基因治疗载体研究的热点。慢病毒载体有下列优点:(1)完美的转染效率:可非常高效地把基因转染到活体模式生物和几乎所有的哺乳动物细胞中,包括分裂和不分裂的细胞。不分裂细胞处于不活跃或者停止生长的状态,非常难转染,例如神经元细胞、原代细胞、干细胞等,针对这类细胞慢病毒载体的转染效率接近100%。(2)稳定长效的表达:载体带有可进行高效率的包装、转染并稳定整合进靶细胞的基因组中的序列元件,目的基因参与细胞的基因重组,形成稳定遗传物质,使得目的基因在细胞中可稳定长期表达。(3)高安全性,低免疫原性:病毒载体自身灭活,无病毒的复制。上海生博提供的慢病毒表达载体是自身复制灭活的,由于细胞不带有病毒外壳基因,转染后的细胞并不能产生病毒粒子。此外整合进基因组后导致5’-LTR启动子失活,阻止了慢病毒的复制。(4)可调控表达:可控表达一直是载体研究的一个重要方向,经过特定的元件修饰的慢病毒表达载体,可实现只有在特定的外源或内源物质的作用下才能产生表达,从而调控目的基因的定时、定量表达。 上海生博提供:各种报告基因(GFP、RFP、mCherry、Luciferase、Egfp-Luciferase等)或标签(FALG、HA、His等)或抗性

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