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- 上海
- 根据客户提供的目的基因，针对该基因设计3个siRNA靶点，再将这些靶点构建到腺病毒载体，生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。
- 2026年01月09日
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- 服务名称：
腺病毒介导的RNA干扰实验
- 提供商：
OBiO和元生物
RNA干扰|腺病毒|腺病毒包装
服务简介：
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象。外源dsRNA 进入细胞后产生的小分子干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）的反义链和多种核酸酶形成了沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，RISC具有结合和切割mRNA的作用而介导RNA干扰的过程。
和元生物腺病毒具有宿主范围广，免疫原性强，基因容量大，不与基因组整合，瞬间表达等特点，目前较为成熟的载体系统有非复制型（如AdMax）和复制型（又叫溶瘤腺病毒）两种。腺病毒适于在短时间内进行基因高表达的实验。
和元生物根据客户提供的目的基因，针对该基因设计3个siRNA靶点，再将这些靶点构建到腺病毒载体，生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。
和元生物服务流程：
和元生物服务优势：
对分裂期细胞和非分裂期细胞均有感染作用
表达迅速高效
包装容量大，最长重组片段可达4.5k
多种载体可选
和元生物可供选择的载体：
| 载体名称 | 载体特点 | 载体启动子 |
| pDKD-CMV-EGFP-U6-MCS | 带EGFP荧光蛋白 | 广泛表达的强启动子 |
| pDKD-Ubc-EGFP-U6-MCS | 带EGFP荧光蛋白 | 泛素启动子，可在干细胞、原代细胞核离体神经元中表达 |
| pDKD-CMV-puro-U6-MCS | 带puro抗性 | 广泛表达的强启动子 |
| pDKD-CMV-mcherry-U6-MCS | 带红色荧光蛋白 | 广泛表达的强启动子 |
| pAdeno-U6-Mir30-CMV-EGFP | - | 可用于过表达mirRNA shRNA |
腺病毒相关技术服务：
腺病毒|基因组编辑
腺病毒|基因表达
腺病毒|RNA干扰
腺病毒|microRNA抑制
腺病毒|microRNA表达
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文献和实验收集病毒。按步骤1收集细胞并准备病毒上清。通过Western blot和/或PCR鉴定重组腺病毒产生。 4、PCR鉴定重组病毒。取5μl病毒上清加入10μl蛋白酶K，55℃孵育1hr,再煮沸5min，离心后取1-2μl作PCR。 五、重组病毒扩增，纯化 1、75cm2方瓶中接种293细胞，至密度达到90%,加入适量病毒上清感染细胞。3-4d后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g转速离心，弃上清。 2、以灭菌PBS重悬沉淀，反复冻融4次。4℃下7000g离心5min
hhyy601 别人赠予基因腺病毒质粒，邮寄过来的，拿到后，我该怎么办？多谢！ freecell 版内以前有讨论的。如果是点在滤纸上的，将滤纸减碎，然后浸泡在TE溶液中若干时间。随后低速离心，取上清。用滤膜过滤。将消毒的TE溶液转化相应宿主菌扩增即可。 whbf5 转化DH5a或者jm109这一类的菌中保种和扩增 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作 （细菌内同源重组 AdEasy System ） 一 目的基因的克隆（以 pshuttle-CMV 质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。 4.
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