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- 线粒体膜电位检测-流式法
- 2026年01月04日
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- 服务名称：
线粒体膜电位检测-流式法
- 提供商：
晶莱生物
- 规格：
实验服务
线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6（3）]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester（TMRM）等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
一、方法
将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1（1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。
二、注意事项
1、始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。
2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化。
荧光探针JC-1是一种阳离子型的亲脂性染料，能够自由穿过细胞膜，随细胞膜电位的变化而在膜两侧保持动态平衡。其特点是线粒体膜电位低时浓度低，主要以单体形式存在，488nm激发时最大发射波长为527nm，呈绿色荧光，胞浆相对线粒体为低电位，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性；膜电位高时浓度高形成聚集体，488nm激发时的最大发射波长为590nm，红色荧光。活细胞线粒体膜电位高，线粒体内JC-1聚集体的浓度高，红色荧光很强，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性，而凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
| 线粒体膜电位检测-流式法 | 样本 | 200元/样本 |
| 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 样本 | 250元/样本 |
JC-1荧光探针法（荧光显微镜观察）
流式检测线粒体膜电位
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文献和实验一、线粒体膜电位检测原理 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件，发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体
在电解质的盐溶液中当从浓度高的一侧向浓度低的一侧扩散时，在组成盐的阴、阳两种离子的淌度存在差别的情况下，淌度高的离子就领先，淌度低的离子就迟后，因为这种关系溶液中就产生了电位差，这就是扩散电位。例如在 NaCl溶液中由于 CI- 的淌度比 Na 大，所以浓度大的部分的电位就比浓度小的部分为正。扩散电位的大小可用下式表示： 这里 u 和 u- 是阳离子和阴离子的淌度， c1 、 c2 是盐的浓度， F是法拉第常数
染料的浓度，引起假去极化。荧光探针JC-1是一种阳离子型的亲脂性染料，能够自由穿过细胞膜，随细胞膜电位的变化而在膜两侧保持动态平衡。其特点是线粒体膜电位低时浓度低，主要以单体形式存在，488nm激发时最大发射波长为527nm，呈绿色荧光，胞浆相对线粒体为低电位，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性；膜电位高时浓度高形成聚集体，488nm激发时的最大发射波长为590nm，红色荧光。活细胞线粒体膜电位高，线粒体内JC-1聚集体的浓度高，红色荧光很强，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性，而凋亡细胞则大多
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