外泌体分离和鉴定

外泌体

外泌体是多泡体限制性膜与细胞质膜融合而释放的脂质双层膜囊泡，直径约30～200 nm，电子显微镜下呈双凹碟形或杯状，外泌体能够运载其内源性的蛋白质、脂质、核酸、miRNA等信息物质参与细胞间通讯和机体的生理代谢过程，被认为是细胞间通讯、疾病诊断和预后循环生物标志物的重要载体，在临床诊断和治疗方面展现出了极具前景的研究价值。外泌体通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性，从而参与机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等生物学过程。

 

外泌体的负富集分离

外泌体在大小、来源和分子内容物方面均存在高度异质性，因此富集分离外泌体是开展其基础研究和临床转化应用的前提。传统经典的富集分离外泌体的方法有：超速离心、密度梯度离心、共沉淀等技术手段。

 

 

外泌体鉴定

WB/ELISA检测膜蛋白：CD9、CD63、CD81，Alix, TSG101, annexins, Rabs等

透射电镜：形态学鉴定， 双层囊膜结构是外泌体重要标志之一。

Nanosight粒径密度分布分析：外泌体特征粒径大多数处于100nm左右。
 

 

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