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晶莱生物
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WB验证外泌体靶蛋白
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样本
技术原理
通过对分离到的外泌体进行蛋白裂解后,WesternBlot进行CD9,CD63,TSG101的检测,鉴定蛋白产物是否来源于外泌体。
结果展示
外泌体进行蛋白裂解后,通过western blot检测外泌体蛋白标志物。
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文献和实验「外泌体 + 环状 RNA」国自然双热点助力肿瘤研究发表高分文章
的外泌体能促进 CRC 的增殖、迁移和侵袭 作者从两种 CRC 细胞系(HCT116和SW480)上清中分别分离获得外泌体,经过透射电镜、NTA 和 WB 鉴定后,确认已分离出外泌体。随后,作者用外泌体处理对应的 CRC 细胞,发现外泌体能显著促进 CRC 细胞增殖、迁移和侵袭,并减少凋亡。 WB 结果也显示,外泌体能提升 CRC 细胞中 BCL-2、 N-cadherin、Vimentin、MMP9 蛋白水平,和降低 E-cadherin、Cleaved-caspase3、Cleaved
分析(NTA)和 WB marker 鉴定。 二、TEM 鉴定外泌体形态: 将提取的外泌体样本置于冰盒中,使用移液枪吸取外泌体样本于铜网上静置 1 min。(用镊子夹铜网要轻,防止铜网夹破)。再将铜网上的外泌体样本吸干,使用移液枪吸取醋酸双氧铀染色液室温染色。随后将染色完成的样本放于灯下烤。样本制好后,观察拍照,保存图片。结果如下: 图一 TEM 鉴定外泌体的形态 从 TEM 结果中可以看出,从肿瘤组织中分离得到的外泌体具有典型的杯托状结构,且数量比较多。 三
从脑组织中分离外泌体的方法。本文主要和大家分享我们从小鼠脑组织中分离外泌体的效果,供大家参考: 一、采用消化+超离法从脑组织中分离外泌体: 将脑组织剪成薄片,放入离心管中加上消化液进行消化,经水浴、反复轻轻上下颠倒,再用移液枪间断缓慢吹吸至消化结束。随后加入培养基于消化液中,混匀,置于冰上。再进行一系列的差速超速离心过程,包括除杂、滤膜过滤、超离等。最后用 PBS 重悬外泌体,用重悬后的外泌体进行下面的透射电镜(TEM)、纳米粒径跟踪分子(NTA)和 marker WB
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