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GRO-seq (新生RNA-seq)服务

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  • GRO-seq (新生RNA-seq)服务
  • 2026年04月28日
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      GRO-seq (新生RNA-seq)服务

    • 提供商

      表观生物

    项目简介

    GRO-seq (Global nuclear Run-On sequencing)是一种专门测量新生RNA的方法。该方法通过对细胞进行迅速冷冻使细胞核内正在转录的复合体处于冻结状态,然后提取细胞核,加入Run on缓冲液使其重新恢复RNA的转录。利用抗BrdU抗体提取带BrU标记的新生成RNA ,用于下一步高通量测序分析。

    新生RNA的变化直接反映了转录调控的多种机理,通过GRO-seq技术,可以观测到基因组水平正在进行的转录,这是一种对所有参与RNA聚合酶位置、数量和定向的高分辨率虚拟图谱。

    应用范围

    1、取代常规RNA-seq,精准检测实时转录状态的基因表达

    2、精确定位基因的转录位置和转录方向

    3、发现直接作用的靶标基因

    4、发现新的转录本,包括非编码RNA

    5、鉴定eRNAs分子

     

    实验流程

     
    产品细节图片1

    送样要求

    1.具备条件的,可以把细胞核分离好液氮速冻并干冰运输。

    2. 不具备前期准备条件的,需提供活细胞及配套培养基,常温运输。如需进行细胞前处理,请提供详细说明和相关材料,并收取相应处理费用。细胞培养及收集需根据细胞类型不同而收取相应费用。

    细胞数量

    1x107个细胞每样本

    仅限物种

    人、大鼠、小鼠

    测序模式

    SE 50

    测序数据量:20M

    分析内容

    1. 数据产出统计,对原始测序数据去接头、去低质量 reads、去污染;

    2. 测序序列与参考基因组序列的比对,Reads在全转录组的分布;

    3. Reads在转录起始位点(TSS)附近的meta分析;

    4. 转录暂停基因分析

    5. eRNA分析

    6. 差异基因分析

    7. 差异基因 GO 功能聚类分析及KEGG生物通路富集分析


    表观生物实测数据

    产品细节图片2图 1. GRO-seq 数据在 UCSC 基因组浏览器中可视化 bed 文件
    产品细节图片3
    图 2. TSS 距离直方图
     
    产品细节图片4
    图 3. 所有样品均位于增强子中心附近的GRO-seq 信号
     
    产品细节图片5
    图 4. 暂停索引变化箱形图
     
    产品细节图片6
    图 5. TSS 周围活跃基因的条件依赖性转录变化的热图
     
    产品细节图片7
    图 6. 重复样本之间转录变化的直方
     

    表观生物客户文章

    1、Cell Death Dis:JUN诱导超级增强子RNA形成R-loop,促进鼻咽癌转移[2]
    此研究发现通过转录因子JUN介导的超级增强子RNA(seRNA)形成R-loop来调节靶基因,从而促进鼻咽癌的转移,并鉴定得NDRG1是一种鼻咽癌转移相关seRNA(seRNA-NPCM)。seRNA-NPCM在鼻咽癌组织和高度转移的细胞中表达上升,在体内和体外促进鼻咽癌细胞转移。此外,临床分析表明,seRNA-NPCM和NDRG1是鼻咽癌患者的独立预后因素。seRNA-NPCM在调控靶基因转录中发挥关键作用,促进鼻咽癌转移。
     
    产品细节图片8
    图7. 左图:GRO-seq分析得S18和S26-DNP细胞的超级增强子eRNAs(eRNA+)百分比;右图:GRO-seq的GSEA分析结果(GRO-seq服务由表观生物提供
     
    产品细节图片9
    图8. S26-DNP细胞进行了H3K27ac ChIP-seq和GRO-seq;RNAPII ChIP-seq数据来自ENCODE(ChIP-seq服务由表观生物提供)
     
    2、Nat Cell Biol:转录因子协调驱动的增强子重编程促进表型可塑性和乳腺癌内分泌耐药[3]

    继发性耐药是抗癌治疗的主要难题,但其背后的分子机制尚不清楚。这项研究在乳腺癌细胞模型上发现内分泌耐药与表型可塑性增强相关,表现为管腔/上皮分化标记物普遍下调,基底/间质浸润标记物上调。此外,在临床乳腺肿瘤和对内分泌疗法耐药的患者的异种移植物样本中也发现了类似的基因表达变化。对调控机制的探究发现,雌激素受体α和其他致癌转录因子(如GATA3和AP1)之间的差异性相互作用,驱动全局增强子获得性/缺失性重编程,大大改变了乳腺癌转录程序。在培养的和异种移植模型中的功能研究表明,揭示了GATA3和AP1在重塑增强子图谱和调节癌症表型中的协调作用。综上所述,此研究表明,增强子上不同的转录因子组合可触发全基因组的增强子重编程,导致转录转变,促进肿瘤表型可塑性和治疗耐药。

    产品细节图片10

    图9. MCF7P和TamR细胞的缺失性LOSS、普通COMMON和获得性GAIN增强子的GRO-seq标签浓度,表明eRNA转录与增强子获得/缺失事件匹配

     

    产品细节图片11

    图10. GRO-seq和ChIP-seq联合分析,图为代表性的ERα缺失性和获得性增强子及其靶基因BCL2和EGFR上的信号,表明eRNA转录还与增强子及靶基因的转录活动负相关

     

    产品细节图片12

    图11. 各组MCF7P细胞EGFT基因位点上的ChIP-seq信号(上图)和GRO-seq信号(下图),此结果与其他更多数据共同表明GATA3和AP1在功能上协调促进TamR相关增强子重编程和基因表达。

     

     

     

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    该产品被引用文献

    [1] Core L J, Waterfall J J, Lis J T. Nascent RNA sequencing reveals widespread pausing and divergent initiation at human promoters[J]. Science, 2008, 322(5909): 1845-1848.

    [2] Jia Q, Tan Y, Li Y, et al. JUN-induced super-enhancer RNA forms R-loop to promote nasopharyngeal carcinoma metastasis. Cell Death Dis 2023 Jul 21;14(7) . (客户文章)
    [3] Bi M, Zhang Z, Jiang Y, et al. Enhancer reprogramming driven by high-order assemblies of transcription factors promotes phenotypic plasticity and breast cancer endocrine resistance.  Nat Cell Biol 2020 Jun;22(6). 
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