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上海瑶韵生物
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文献和实验通用,尤其是在进行动态检查时。医琳师妹:我将我所作的方法与大家共享:吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡(acridine orange/ethidium bromide, AO/EB):(1)细胞爬片:在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片,接种细胞悬液,干预后,予95%乙醇固定15分钟,微干,然后准备荧光染色。将100mg/L溶于PBS的吖啶橙和100mg/L溶于PBS的溴化乙锭各5μl(临用前混合加入,加样量宜小,有时各2μl-5μl足够,量太大容易形成细胞凋亡的假阳性),在照相前混匀
内换液彻底清除,避免影响细胞状态。 2. 标准化实操流程 铺板操作规范:细胞团均匀滴加至孔板,十字轻柔晃动(前后、左右小幅移动),禁止打圈摇晃,避免细胞全部聚集孔板边缘。放培养箱时轻拿轻放。 单克隆挑取技巧:弃去原有培养基,沿孔壁缓慢加入DPBS缓冲液,轻柔洗涤1-2次以去除死细胞和碎片,最后更换为新鲜培养基。 倾斜孔板使克隆暴露,使用10μL无菌枪头轻刮克隆,吸取细胞团,动作轻柔以防细胞分散。将吸取的细胞团转移至含基质胶的12孔板中,轻微晃动孔板使细胞均匀分布,放回培养箱。 换液标准
s变性、55℃/1min退火、72℃/1min延伸,循环30次后72℃延伸5min。第1次PCR反应取模板10μL,第2次PCR反应以第1次PCR扩增产物为模板取1μL。 一种名为BM-Cyclin的化学试剂,除体外培养癌细胞中支原体污染具体方法: 1、选用抗支原体药物(BM-Cyclin-1、2 ),磷酸缓冲液配制,溶液抽滤除菌,0~4℃保存。 2、细胞处理过程:细胞传代同时加BM-Cyclin-1 10μg/ml,37℃培养3天;胰蛋白酶消化、传代,加入BM-Cyclin-2 5μg
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