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- 2025年07月15日
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文献和实验(pH7.6)溶液使其浓度为100/ml。 ２）按如下所述设立连接反应混合物： a．将0.1μl载体ＤＮＡ转移到无菌微量离心管中，加等摩尔量的外源ＤＮＡ。 b．加水至7.5μl，于45℃加温５分钟以使重新退炎的粘端解链，将混合物冷却到０℃。 c．加入：10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液 １μl Ｔ４噬菌体ＮＤＡ连接酶 0.1Weiss单位 ５mmol/L ATP 1μl 于16℃温育１－４小时 10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液 200mmol/L同Tris
s,37℃60s,72℃120s,共25～30个循环。 注：[1]反应缓冲液[10×]含：100mmol/l Tris-HCl pH8.3(25℃), 15mmol/L KCl, 15mmol/L MgCl2 , 0.01%(W/V)明胶（Sigma G2500） [2]酶储存缓冲液（-20℃）含：50%甘油，100mmol/l KCl, 20mmol/L Tris-HCl ph8.0 0.1mmol/L EDTA, 1.0mmol/L DTT
我们知道1ug human genomic DNA 大约在3X105幂个模板分子,这样的模板分子数目可以是引物与模板很好的结合.当模板的浓度过低,比如低于100个分子时, 引物和模板之间就很难发生反应.引物容易自身进行反应形成二聚体.这样就有来了个 booster PCR我一直找不到合适的词来翻译这个booster.具体是这样的.开始几个cycles保持primer的低浓度,保证primer:template的molar ratio在10 7~ 10 8. 以确保开始扩增的准确性.然后booste
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