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文献和实验效率增加3-5倍,然后降低到初始水平。 9)用冷却的无菌吸头从每种感受态细胞悬液中各取200μl转移到无菌的微量离心管中,每管加DNA(体积∞10μl,DNA∞50ng),轻轻旋转以混匀内容物,在冰中放置30分钟。 10)将管放到预加温到42℃的循环水浴中放好的试管回上,恰恰放置90秒,不要摇动试管。 11)快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却1-2分钟。 12)每管加800μlSOC培养基(见附录A)。用水溶将培养基加温至37℃,然后将管转移到37℃摇床上,温育45分钟细菌复苏,并且表达
的Fc段结合的蛋白A。这样可特异地把生物素化的DNA分子和抗原-抗体复合物连接在一起。 选用BSA作抗原进行免疫PCR实验,结果表明,可检测出580个抗原分子(9.6×10-22 mol/L),而且可以完全避免其它非特异信号的干扰。与采用碱性磷酸酶的ELISA相比,其灵敏度可提高105 倍,较常规的放名分析灵敏度也高出几个数量级。 免疫PCR产物在普通的琼脂糖电泳上就可以检测出来,如用更好的方法来检测PCR产物,如放射性同位素,荧光物或酶等掺入到PCR产物中,可进一步提高其灵敏
我们知道1ug human genomic DNA 大约在3X105幂个模板分子,这样的模板分子数目可以是引物与模板很好的结合.当模板的浓度过低,比如低于100个分子时, 引物和模板之间就很难发生反应.引物容易自身进行反应形成二聚体.这样就有来了个 booster PCR我一直找不到合适的词来翻译这个booster.具体是这样的.开始几个cycles保持primer的低浓度,保证primer:template的molar ratio在10 7~ 10 8. 以确保开始扩增的准确性.然后booste
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