北京SY0282型零背景TOPO-TA克隆试剂盒(不含MCS

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售，产品线涵盖北京SY0282型零背景TOPO-TA克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京SY0282型零背景TOPO-TA克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)促销
英文名：Zero TOPO-TA Simple Cloning Kit, MCS-Depleted
编号：SY0282
产地：国产|进口
规格：20T
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA*(代"片")段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物；
5）本产品不含多克隆酶切位点（MCS），使用者在引入后续酶切位点进行酶切操作时，不会受到MCS位点的影响，从而增加酶切效率以及克隆成功率。

产品用途：A尾PCR产物的快速克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。

产品组份：
pESI-T simple vector (30ng/μl)————20μl
1kb control insert (40ng/μl)——————5μl
10×Enhancer————————20μl

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

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·台盼蓝
编号：SY0511
英文名称：Trypan blue
规格：10g
台盼蓝（Trypan Blue），一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（活细胞呈透明无色）和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。细胞计数前，需要用生理盐缓冲液或者无血清培养基对细胞进行充分的清洗，因为细胞对血清蛋白具有非常高的亲和力，因此残留的血清蛋白会导致较暗的染色背景。

台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝（合适浓度）还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。

本品为细胞培养级别，台盼蓝染色法主要用来鉴定组织分离到原代细胞的存活情况。只需3-5min染色，即可通过血球计数法分析结果。

中文别名：直接蓝14;锥虫蓝;曲利苯蓝
英文别名：Direct Blue 14; Dianil blue; Diaminine Blue
CAS：72-57-1
分子式：C34H24N6Na4O14S4
分子量：960.81
外观：棕色至黑褐色、黑色、黑褐色粉末
组分：染料含量，>40%
溶解性：溶于水（10mg/ml）
储存条件：室温
结构式


储存液制备
可称取0.4g台盼蓝溶于100ml 0.85% NaCl或者Hank’s溶液，配制成0.4% 的台盼蓝储存液，建议过滤除杂，室温保存即可。使用时按照1:9（细胞悬液）稀释即可【注：具体的稀释倍数需根据细胞本身的密度做出适当调整，降低稀释倍数或者提高储存液浓度】。染色时间控制在3min左右。因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。


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·IRF1-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0077
英文名称：IRF1 luciferase reporter plasmid
规格：1μg
IRF1荧光素酶报告基因（IRF1 luciferase reporter plasimd）是用于检测IRF1转录活性水平为目的的报告基因。IRF1(Interferon Regulatory Factor 1)是IRF家族中最早被发现的核转录因子，具有广泛的生物学功能，它调节干扰素系统，抑制细胞生长，抑制肿瘤形成。

IRF1报告基因主要用于检测细胞中IRF1的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMIRF1-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个IRF1结合位点，可以高灵敏度地检测IRF1的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得IRF1报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1.pGMIRF1-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
2.IRF1的激活剂，可作为IRF1报告基因的阳性对照。

储存条件：-20℃。


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·小牛肠碱性磷酸酶
编号：SY0388
英文名称：Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP)
规格：1000U
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

来源：携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制（Quality Control）：无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活（Thermal Inactivation）：在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。
储存液条件（Storage conditions）：10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.
活性定义：在pH9.8, 37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH（Optimal pH）：该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系（Optimal Buffer）：AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2)
储存条件：-20℃

使用方法:
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
无菌ddH2O————Up to 50µl
DNA 片段*————1-20pmol
Alkaline Phosphatase————1-2µl
10×AP buffer————5µl
【*】：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。

2 酚氯*(代"仿")法抽提DNA
① 苯酚/氯*(代"仿")/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② 氯*(代"仿")/异戊醇（24:1）抽提。

3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。

4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。

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