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赫澎(上海)生物
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文献和实验核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(ribulose-1,5-bisphosphatecarboxylase,RuBPCase)是光合作用碳代谢中的重要的调节酶,是植物中最丰富的蛋白质,主要存在于叶绿体的可溶部分,总量约占叶绿体可溶蛋白50%~60%。本实验用分光光度法测定酶的羧化能力。一、原理: 在RuBPCase的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合,产生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生
酶活力的大小常以每mg酶蛋白每分钟所分解的底物量(或生成的产物量)μmol数表示之。测定酶活性的方法很多,常因反应的底物和产物的性质不同可选用不同的方法,应用最广泛的是比色法或分光光度法。凡反应系统中的化合物在紫外区或可见光区有吸收峰的都可以用这种方法进行测定。如果酶催化的是一需氧反应,如氧化酶,则可用测压法或氧电极法。如果催化的反应系统中需要ATP或产生ATP,如一些激酶;或是有NAD存在,如一些脱氢酶和氧化还原酶;或者反应产生H2O2,如一些氧化酶,这些酶的活性可以用生物发光或化学发光方法进行
相际间的质量传递;(4)不存在有机溶剂残留问题;(5)大量杂质能与所有固体物质一同除去,使分离过程更经济;(6)易于工程放大和连续操作。由于双水相萃取具有上述优点,因此,被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。 3.2 双水相萃取在分离和提取各种蛋白质(酶)上的应用 用聚乙二醇(PEG)/羟丙基淀粉酶(Reppal PEG)体系经两步法可从黄豆中分离磷酸甘油酸激酶(PGK)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)。在黄豆匀浆中加入PEG4000,可絮凝细胞碎片及大部分杂蛋白
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