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赫澎(上海)生物
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文献和实验琥珀酸脱氢酶硝基蓝四唑盐法 在生物代谢过程中,由氢的供体(donor)把氢原子转移到氢的受体(receptor)的酶促反应称脱氢酶反应,该反应由脱氢酶(dehydrogenases)催化。脱氢酶种类很多,其活性均可通过四唑盐显示。四唑盐作为脱氢酶反应中的受氢体,接受脱氢酶作用于底物所释放的氢而形成有色的甲腊(formazane),沉积于酶所在部位。 琥珀酸脱氢酶(succlnate dehydrogenase,SDH)是线粒体呼吸链的第一个酶,存在于所有有氧呼吸的细胞
样本 1) 取50 mg组织置于培养皿中,手术剪剪碎,加入200 μL预冷的裂解液工作液,冰上用玻璃匀浆器匀浆 (组织量加倍时,加入的预冷裂解液也加倍)。 2) 将匀浆好的样本转移到1.5 mL的离心管中,冰浴放置5 min裂解。 3.12,000 rpm在4°C下离心10-15 min。 4.小心地吸取上清转移至新的EP管中,并置于冰上待用。 5.立即测定Caspase的酶活性或者-70°C保存样本,亦可取少量样本用Bradford法[E-BC-K168,详询当地经销商]测定蛋白浓度。 6.Caspase
乳酸脱氢酶硝基蓝四唑盐法乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase,LDH)是辅酶I(NAD)依赖性脱氢酶,能氧化乳酸为丙酮酸,为无氧糖酵解途径的标志酶。硝基蓝四唑盐法显示LDH活性的原理与显示SDH活性的原理基本相同,只是需加用NAD,氢从反应生成的还原型辅酶I(NADH)传递给四唑盐,将其还原为甲脂。 1)孵育液配液0.06mol/LPBS 0.25ml1.0mol/LD,L乳酸钠 0.1ml0.4%NAD 0.1ml0.
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