血清血浆microRNA提取试剂盒

✦ 适用范围：

✦ 试剂盒组成、储存、稳定性：

储存事项：

1. 不适宜储存于低温（4℃或者 - 20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存宜在室温下（15℃~25℃）进行。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

✦ 产品介绍：

✦ 产品特点：

1. 完全不使用有毒的phenol、氯仿和 beta 巯基乙醇等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 简捷，单个样品操作一般在 15 分钟内完成。
3. 独家研发成功的 DNA 清除 / RNA 吸附通用柱技术可以有效清除 gDNA 污染，得到的 RNA，纯度高，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的值高达 2.1～2.2。一般不需要 DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR、高通量测序建库等实验。
4. 世界领先适应性极其广泛，可以提取包括棉花、月季、拟南芥、水稻、烟草、杨树等数百种国内外试剂盒提取失败的样品。如果特别复杂的多糖多酚等样品效果不佳，或者其它公司失败的特别困难样品可以选购艾德莱货号：RN53 EASySpin Plus 复杂多糖多酚植物 RNA 提取试剂盒。

✦ 注意事项：

1. 所有的离心步骤均可在室温完成。使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机。
2. 需要自备乙醇，研钵（可选）。
3. 裂解液 FEA 和去蛋白液 RW1 中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 本试剂盒可去除体系中大部分的 DNA 残留，纯化获得的 RNA 通常无需使用 DNase I 处理即可用于下游实验操作。不同样本核酸含量相差大，如果下游实验对痕量 DNA 十分敏感，可以使用 DNase I（艾德莱货号：RN45）进一步清除 DNA 污染。

✦ 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

1. 取 600 μl 裂解液 FEA，转入 1.5ml 离心管中备用。
2. 液氮中研磨适量植物 / 真菌组织成细粉后，取 50 mg-100 mg 细粉转入上述装有裂解液 FEA 的离心管，立即剧烈震荡 30 sec，使样本与裂解液充分混合裂解完全，13,000 rpm 离心 5 min，立即进行后续操作。
    
   ▲样品处理量可根据具体情况增减，例如果实类水分多可以适当加大处理量。
3. 取裂解物上清约 500 μl 至 DNA 清除 / RNA 吸附通用柱（已放入收集管中，以下简称通用柱）中，13,000 rpm 离心 30 sec，弃掉通用柱，保留收集管中的滤液（RNA 在滤液中）。
    
   ▲上清体积可根据实际情况做出相应调整。
4. 向收集管中加入 0.5 倍滤液体积的无水乙醇（约 250 μl，根据上清实际情况调整），移液器吹打混匀。
    
   ▲若加醇后出现浑浊或有絮状产物产生，属正常现象，可将混合液（包括絮状物）都加入通用柱中继续进行后续操作。
5. 立即将上述混合液转移至一个新的通用柱内（已放入收集管中），静置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液，将通用柱放回收集管。
    
   ▲吸附柱容量为 750 μl，若混合液超过该体积请分多次进行上柱。
6. 向通用柱中加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
7. 向通用柱中加入 500 μl 漂洗液 RW（使用前请检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
8. 重复步骤 7 一遍。
9. 将通用柱放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 min。
10. 将通用柱转移至新的 1.5 ml 离心管中，向吸附柱膜中央悬空滴加 30-50 μl 的 RNase-free ddH₂O，静置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
     
    ▲洗脱体积建议不少于 30 μl，体积过小会影响核酸回收效率。
     
    ▲以下步骤都可以帮助提高 RNA 产物浓度：
     
    RNase-free ddH₂O 于 90℃预热；
     
    将第一次洗脱液重新加入吸附柱进行洗脱。
11. 提取的 RNA 可直接用于下游实验或 - 85℃～-65℃保存。