DN14-植物基因组DNA快速提取试剂盒

DN14-植物基因组DNA快速提取试剂盒

产品介绍：
改进的经典CTAB植物DNA抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，chloroform抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质（根据需要，上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA，进一步去除其它各种杂质），然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的phenol等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

1. 裂解液 PL 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 55℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。结合液 PQ 盐酸胍浓度高，加入乙醇后可能出现一些沉淀不影响使用，直接取上清用。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴预先热到 65℃备用。
3. 需要自备氯仿、无水乙醇和 β- 巯基乙醇。
4. 不同来源的植物组织材料中提取 DNA 的量会有差异，一般 100 mg 新鲜组织典型产量可达 3-25μg。
5. 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用 TE 缓冲，但应该确保 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在 - 20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
6. 本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积，如果样品 DNA 含量低或者产量低，需要扩大提取量，还需要另外购买溶液。

1. 取适量植物组织（新鲜组织 100 mg 或干重组织 30 mg，可适当多取一些样品量弥补在研磨上的损失）在研钵中加入液氮充分研磨成细粉。
2. 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有 600 μl 65℃预热裂解液 PL 的离心管中（实验前在预热的 PL 中加入 β- 巯基乙醇，使其终浓度为 2%），迅速颠倒混匀后，加入 5 μl RNaseA，将离心管放在 65℃水浴 20-30 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

    

   ▲ 如果组织干燥或者残留 RNA 较多导致电泳条带拖尾，条带扭曲，背景很高等不正常电泳情况，可以加 1% RNase 酶 (10mg/ml) 37℃或者室温放置 20 min 即可消化 RNA，消化完后不需要特殊处理便可直接用于 PCR 或者酶切。
3. 加入 700 μl 氯仿，充分混匀，13,000 rpm 离心 5 min。

    

   ▲ 可选步骤（一般不需要）：若提取富含多糖多酚或淀粉植物，可在第 3 步前，用 Tris 饱和酚（PH8.0）/ 氯仿（1：1）等体积抽提一遍。
4. 小心吸取上清（约 600 μl）到一个新的离心管，加入 1.5 倍体积结合液 PQ（请先检查是否已加入无水乙醇！），立即涡旋混匀。
5. 将混匀的液体转入吸附柱 AC 中，13,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。（吸附柱容积为 700 μl 左右，可分次加入离心。）
6. 加入 500 μl 抑制剂去除液 IR，13,000 rpm 离心 30 sec，弃废液。
7. 加入 600 μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇！），13,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。
8. 重复操作步骤 7。
9. 将吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟。尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50-100 μl 洗脱缓冲液 EB，室温放置 3 分钟，13,000 rpm 离心 1min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 2 分钟，13,000 rpm 离心 1min。
    ▲ 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低洗脱效率，减少 DNA产量（最小不应少于 40 µl）。
    ▲ 如追求最高产量，洗脱缓冲液事先在 80-100°C 水浴中预热后再加可以提高产量。