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- 详细信息
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- 技术资料
- 英文名：
RN28-EASYspin Plus 组织/细胞RNA快速提取试剂盒
- 库存：
充足
- 供应商：
杭州昊鑫生物
- 规格：
50次
产品介绍：
3.独家研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
目录号：RN28
试剂盒组成、储存、稳定性：
| 试剂盒组成 | 保存 | 50 次(RN2801) |
| 裂解液 RLT Plus | 室温 | 30 ml |
| 去蛋白液 RW1 | 室温 | 35 ml |
| 漂洗液 RW | 室温 | 10 ml（第一次使用前按瓶子标签指示加无水乙醇） |
| RNase-free H2O | 室温 | 5 ml |
| （DNA 清除/RNA 吸附)通用柱和收集管 | 室温 | 100 套 |
本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
储存事项：
1. 不合适的储存于低温（4°C 或者-20°C）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下进行。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品更新提醒：
1. 基因组 DNA 清除柱和 RNA 吸附柱是完全相同的离心柱。旧版说明书命名按照提取过程中的作用区分命名，新版为了使用方便不混淆，按照本质是同一个东西命名为：DNA 清除/RNA 吸附通用柱，两包离心柱是同一个东西不用再区分了。
2. 旧版操作步骤中加入等体积 70%乙醇，改成加入 0.5 倍体积无水乙醇。因此试剂盒不再需要 70%乙醇瓶子这个组分了。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成。使用转速可以达到13, 000 rpm的传统台式离心机。
2. 裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 本试剂盒可去除体系中大部分的DNA残留，纯化获得的RNA通常无需使用DNase I处理即可用于下游实验操作。不同样本核酸含量相差大，如果下游实验对痕量DNA十分敏感，可以使用DNase I进一步清除DNA污染（详情可以联系艾德莱技术咨询）。或者提取过程中进行DNase柱上消化（货号：RN34 DNase I 柱上消化试剂盒）
4. 样品处理量不要超过DNA清除/和RNA吸附通用柱的处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5 mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3×106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过3-4×106，组织不超过10 mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
第一次使用前请先按漂洗液 RW 瓶标签指示加入无水乙醇!充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
一、 样本处理
A． 贴壁细胞：无需消化，吸除细胞培养基上清后可直接在培养皿中立即加入 500 μl 裂解液 RLT Plus 消化裂解（可用移液器反复吹打帮助裂解）；不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰酶消化后离心收集细胞，去上清，细胞沉淀中加入 500 μl 裂解液 RLT Plus（< 8×106个细胞），涡旋震荡或移液器吹打直至无明显细胞团即可。
▲贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂开，并已释放出全部 RNA，继续做即可。
B．悬浮细胞：直接离心收集细胞，13, 000 rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来，吸除上清后加入 500 μl Buffer RLT Plus（< 8×106 个细胞），涡旋震荡或移液器吹打直至无明显细胞团即可。
C．动物组织：取新鲜组织约 15-25 mg（< 30 mg）加入 500 μl 裂解液 RLT Plus，用玻璃匀浆器或电动匀浆器将组织研磨均匀。若用液氮研磨，在液氮中研磨组织成粉末后，取适量组织细粉 15-25 mg（< 30 mg）转移至预装有 500 μl Buffer RLT Plus 的 1.5 ml 离心管，涡旋震荡或移液器吹打直至无明显细胞团即可。
二、 RNA 提取
1. 将处理好的匀浆液加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱上(柱子放在 2 ml收集管内)，13, 000 rpm 离心 1 min，丢弃通用柱，保留收集管中的滤液（RNA 在滤液中）
2. 向滤液中加入 0.5 倍滤液体积的无水乙醇（约 250 μl），移液器吹打混匀。
▲若加乙醇后出现浑浊或有絮状物产生，属正常现象，立即吹打混匀，不要离心。
3. 立即将上述混合液加入至一个新的 DNA 清除/RNA 吸附通用柱内（已放入收集管中），静置 1 min，13, 000 rpm 离心 30 sec，弃滤液，将通用柱放回收集管。
4. 向通用柱中加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，13, 000 rpm离心 30 sec， 弃滤液。
5. 向通用柱中加入 500 μl 漂洗液 RW（使用前请检查是否已加入无水乙醇），13, 000 rpm 离心 15 sec，弃滤液。
6. 重复步骤 5 一遍。
7. 将通用柱放回空收集管中，13 ,000 rpm 空甩离心 2 min。尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8. 将通用柱转移至新的 1.5 ml离心管中，向通用柱膜中央悬空滴加 30-50 μl的 RNase-free ddH2O，静置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
▲洗脱体积建议不少于 30 μl，体积过小会影响核酸回收效率。
▲以下步骤都可以帮助提高 RNA 产物浓度：RNase-free ddH2O 于洗脱前先在 90°C 预热；将第一次洗脱液重新加入通用柱进行第二次洗脱。
9. 提取的 RNA 可直接用于下游实验或-85°C ~-65°C 保存。
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文献和实验Lactoferrin improves cognitive function and attenuates brain senescence in aged mice（乳铁蛋白可改善老年小鼠的认知功能并减轻其脑衰老）
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技术资料资料下载：
RN28发表文献 -EEF1A1 调控 ARV σC 介导的细胞凋亡与病毒生长.pdf 附 (下载 0 次)
RN28-EASYspin Plus 组织_细胞RNA快速提取试剂盒说明书.pdf 附 (下载 8 次)
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