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- 2025年07月10日
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艾柏森（北京）生物科技有限公司
重组IgG制备
随着重组蛋白技术的进一步完善，真核哺乳动物细胞蛋白表达系统凭着蛋白折叠和完善的翻译后休息系统，表达的抗体更接近天然构象，从而具有和天然抗体相同的生物活性，因此常用于功能蛋白、抗体及临床疫苗的生产。艾柏森生物提供工业级别重组IgG、Fab和ScFv等抗体片段的制备和纯化服务。
瞬时转染表达
瞬时转染（transient transfection）是将重组抗体基因导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组DNA导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的DNA不必整合到宿主染色体，可在比稳定转染较短时间内收获转染的细胞，并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。艾柏森提供从基因优化、载体构建、瞬转HEK293细胞/CHO细胞、表达纯化小试以及大规模发酵服务。可以短时间内生产mg至g级重组IgG。
构建稳定细胞系
构建目的基因的表达质粒后，可通过电转、慢病毒转染等方法，将质粒转染至宿主细胞。选用DHFR /GS基因表达系统,将转染的细胞培养在合适的选择性培养基中，然后进行MTX/MSX压力筛选,以产生稳定细胞库。
艾柏森生物使用Molecular ClonePix2系统,高通量、自动化的筛选出100-200个高水平分泌克隆，并从中挑选最佳10-20个高产克隆，进行下一步的稳定性测试。我们挑选出最优的10个克隆，进行10次传代后，qPCR和WB法检测细胞株的稳定性。我们提供序列及载体报告, 3株表达最好的细胞株，表达分析、稳定性测试报告以及详细的稳定细胞株构建报告。
IgG构建服务简介
VL和VH基因片段的密码子优化和基因合成
表1 噬菌体展示技术服务项目：IgG的重组表达生产
| 服务描述 |
数量 |
服务周期 |
价格 |
| VL和VH基因片段的密码子优化和基因合成 |
1 |
6周 |
¥16000 |
| 全抗体重组表达载体的构建 |
1 |
||
| 瞬时表达（293/CHO细胞） |
1 |
||
| ELISA、WB检测 |
1 |
||
| 抗体制备和纯化（1.0mg） |
1 |
||
| 附加抗体制备和纯化（¥3600/mg） |
N/A |
TBD |
TBD |
| 总计： |
|
1.5 月 |
¥16000 |
| 注：可提供VH和VL的cDNA片段（pcDNA3载体表达，¥1800/克隆）； 客户需支付80%的预付款。 |
|||
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文献和实验首先用硫酸铵或硫酸钠盐析法粗提丙种球蛋白，再进一步纯化，常用的方法有： 1.离子交换层析法：离子交换剂有DEAE纤维素和QAE纤维素。 2.凝胶过滤医学教育|网搜集整理：通过多孔凝胶介质达到分离目的。 3.亲和层析法：采用纯化抗原或粗提抗原交联的sepharose4B的层析柱来制备。 4.酶解法【如制备F（ab‘）2】：片段用胃蛋白酶水解制备。
相关专题 （一）原理 IgG是免疫球蛋白 （Immunoglobulin，简称IgG）的主要成分之一，分子量约为15万~16万，沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种，要从血浆中分离出IgG，首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序，使IgG在样品中比例大为增高，然后再纯化而获得IgG。 盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一。许多蛋白质在纯水或低盐溶液中溶解
4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测一次OD600nm，至OD600nm≤0.5时停止培养；(2) 每组取培养液3个2ml转入2ml离心管中，在冰上冷却20-30min，于4℃，4000r／
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