- ¥30 - 10000
- 百奥莱博
- 北京
- BTN90805-1N
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20度冷冻
- 保质期：
一年
- 英文名：
Instant PCR Kit
- 库存：
888
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格：
1mL/10mL/100mL/1L
| 规格： | 1mL | 产品价格： | ¥30.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 10mL | 产品价格： | ¥250.0 |
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ¥1800.0 |
| 规格： | 1L | 产品价格： | ¥10000.0 |
货号:BTN90805-1N
规格:1mL
英文:Ready-to-use PCR Kit
即用型PCR试剂盒包含Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分, 用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应, 具有广泛的用途。有以下特点：
1.扩增效率和灵敏度更高。
2.使用改良型PCR染料，与荧光PCR兼容，此染料功能类似溴酚蓝，扩增结束后无需添加上样液及电泳指示染料即可直接电泳检测。
3.方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
4.快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
5.本产品A型含电泳染料,PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
6.产物可直接用于T载体克隆，不需要额外的加A反应。
即用型PCR试剂盒的规格及成分：
1.PCR MagicMix×1mL
2.专用染料×40μL
注：本产品分A和B两种
A型PCR MagicMix含有专用染料；
B型PCR MagicMix不含专用染料，染料单独提供。
运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年
即用型PCR试剂盒的使用方法：
自备试剂：DNA模板、引物、超纯水。
以30 uL的标准PCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分：
PCR MagicMix×15μL
DNA模板(自备)
哺乳动物基因组DNA×0.5～1ug
酵母基因组DNA×5～500ng
细菌基因组DNA×0.5～50ng
质粒DNA×5～500pg
PCR回收片段×1～100pg
PCR引物(自备)×10 pmol each
补水到30μL
放入PCR仪中进行PCR, 结束后取5-10 uL直接上样电泳（A型产品不需要额外再加DNA上样液）, 红色染料电泳速度相当于50 bp DNA片段。B型产品用户按照1.5mL PCR MagicMix加入60μL专用染料。
注意：
1．如果反应体系不是30uL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果DNA模板中有PCR不明抑制物（植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物），可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂（BTN60804，30uL体系中加3uL），可能会对PCR有帮助。
与即用型PCR试剂盒相关的资料，PCR反应的影响因素：
变性温度与时间：模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20～30秒，高温时间应昼缩短，以保持耐热DNA聚合酶的活力，最高变性温度不宜超过95℃。
退火温度与时间：退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45～68℃之间。设置特定反应的最适退火温度，可根据引物的（G+C）%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30～60秒，足以使引往返与模板之间完全结合，长时间退火没有必要。
延伸温度与时间：PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增2 Kb片段，若使用Taq酶只需1分钟，使用Pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现，时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：可根据模板DNA的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因互，设定20-40个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：50 μL反应体系可用0.5-5 U酶，酶量的选择与模板DNA的量，扩增片段大小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。
模板：模板可以是单链DNA，也可以是双链DNA，质粒DNA的扩增效率略低于线状DNA。模板加量一般不需太多，不超过1 μg为宜，因为加量过多可能导致非特异性扩增增加，但是要考虑模板中靶序列的含量。例如，使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列，就需要适当加大模板用量。
引物：引物与模板配对的长度应到少为17个核苷酸，最高不宜超过30个核苷酸，最佳长度为20～24个核苷酸，如需插入酶切位点，应在酶切位点5’端多加几个碱基，有利于酶切。引物的（G+C）%含量组成应均匀，尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中（G+C）%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显的次级结构，如发夹结构。两个引物之间不应发生互补，特别是在引物3’端。如果可能，引物3’端最好富有GC，这样退火后有利于引物3’端的延伸。人工合成的引物最好经验丰富色谱层析或PAGE纯化，以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终尝试一般为0.1-2 μM左右，尝试太高会导致非特异性扩增，太低则扩增产物太少。
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