DN15新型植物基因组DNA快速提取试剂盒

DN15-新型植物基因组DNA快速提取试剂盒

产品介绍：

该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的phenol氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的phenol等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

适用范围：

试剂盒组成、储存、稳定性：

储存事项：

1. 缓冲液 AP1、AP3/E 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3 加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000rpm 的传统台式离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴锅预热到 65℃备用。
3. 缓冲液 AP3/E 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 不同来源的植物组织材料中提取 DNA 的量会有差异，一般 100mg 新鲜组织典型产量可达 3-25μg。
5. 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在 - 20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：

• 第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方瓶钩标标记已加入乙醇，以免多次加入！
• 第一次使用前请先在缓冲液 AP3/E 中加入指定量无水乙醇！

1. 取适量植物组织（新鲜组织 100 mg 或干重组织 20 mg，可适当多取一些样品弥补粘在研钵上的损失）在研钵中加入液氮充分研磨成细粉。

    

   研磨前，可准备一个 1.5ml 离心管，加入 400μl 缓冲液 AP1 和 4μl RNase A (10 mg/ml) 室温备用。
2. 转移细粉（新鲜组织 100 mg 或干重组织 20 mg）到前面准备的 1.5ml 离心管（已加入 400μl 缓冲液 AP1 和 4μl RNaseA (10 mg/ml)）旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。
3. 65℃水浴 10 分钟，在水浴过程中可颠倒离心管 2-3 次，混合样品。

    

   注意：此步骤也可室温操作，室温放置 10 分钟，但是 DNA 得率会降低一些。
4. 加入 130 μl 缓冲液 AP2，旋涡振荡混匀 1 分钟，冰上放置 5 分钟，13,000rpm 离心 5-10 分钟，小心吸取上清到一个新的 1.5ml 离心管，注意不要吸到界面物质。

    

   此步骤可以洗去去除蛋白、多糖、峰等杂质。
5. 计算上清量，加入 1.5 倍体积的 AP3/E（请先检查是否已加入无水乙醇），立即振荡混匀。

    

   加入 AP3/E 可能会出现絮状沉淀，但不影响 DNA 提取。注意将 AP3/E 直接加入到上清并立即吹打或者振荡混匀。
6. 将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中） 13,000 rpm 离心 30-60 秒， 倒掉收集管中的废液（先加 650μl 离心，
   弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心）。 
7. 加入 600μl 漂洗液 WB（ !），13,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
8. 重复一遍操作步骤 7。

注意：如果吸附柱膜还是呈现较多绿色色素，可添加此步漂洗：向吸附柱 AC 中加入 500μl 无水乙醇，13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。

      9. 将吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟， 尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
     10. 取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在 加 50μl- 100μl洗脱缓冲液 EB， 室温放置 3-5 分钟， 13,000 rpm 离心 1 分钟。将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置 2 分钟， 13,000 rpm 离心 1 分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计需要更高产量，可以增大洗脱体积，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于 50μl，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。 

      11.DNA 可以存放在 2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在 - 20℃。