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TRIpure Reagent（Trizol总RNA提取试剂

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  • RN0102
  • 2025年12月29日
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    • 英文名：

      TRIpure Reagent

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      充足

    • 供应商：

      杭州昊鑫生物科技股份有限公司

    • 规格：

      100ml

     TRIpure Reagent（Trizol总RNA提取试剂）

    目录号：RN0102

    适用范围：适用于各种动植物组织细胞总 RNA、DNA、蛋白的快速抽提

    产品储存：TRIpure 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在 2~8℃的环境下。

    重要提示：有毒物接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求phenol和其他成分的正确治疗方案。

    产品介绍：

    TRIpure 试剂是直接从细胞或组织中提取总 RNA 的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持 RNA 的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水层和有机层。RNA 存在于水层中。收集上面的水层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水层后，样品中的 DNA 和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇能沉淀出中间层的 DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。其纯化 DNA 对于样品间标准化 RNA 的产量十分有用。
     
    无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织 (50-100mg) 和细胞 (5×10⁶) 以及大量的组织 (>1g) 和细胞 (>10⁷) 均有较好的分离效果。TRIpure 试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIpure 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白的污染。故而能够作 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly (A) 选择、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于 PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的 DNaseⅠ 来处理抽提的总 RNA。
     
    TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种 RNA 的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的 RNA 琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于 7kb 和 15kb 之间不连续的高分子量条带 (mRNA 和 hnRNA 成分)，两条优势核糖体 - 5kb (28S) 和 - 2kb (18S)。低分子量 RNA 介于 0.1 和 0.3 kb 之间（tRNA, 5S）。当抽提的 RNA 用 TE 稀释时其 A260/A280 比值 > 1.8。

    注意事项：

    1. 当 TRIpure 用量少于 2ml 时建议使用清洁的一次性的聚丙烯材质试管。
    2. 当 TRIpure 用量较大时，可以使用玻璃试管 (Corcs) 或聚丙烯试管，事先检验以确保该试管可以耐受加入 TRIpure 和氯仿后 12,000×g 的离心力。不可使用有裂缝或者破损的试管。
    3. 离心前小心平衡试管。
    4. 离心前玻璃管口必须盖上铝箔并用石蜡膜封口，聚丙烯管必须盖紧。
    5. 从少量的组织 (1-10mg) 或细胞 (10²-10⁴) 中分离 RNA 样品：往组织或细胞中加入 800μl TRIpure。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤 2 中的抽提操作。在用异丙醇沉淀 RNA 之前，加入 5-10μg 无 RNA 酶的 glycogen 作为水层的载体。为降低其黏度在加入氯仿前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组 DNA。Glycogen 会留在水层中并和 RNA 共析出。在浓缩到 4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制 PCR。
    6. 在匀化后和加入氯仿之前，样品可以在 - 60~-70℃保存至少一个月。RNA 沉淀 (步骤 4，RNA 漂洗) 溶于 75% 的乙醇在 2~8℃至少可以保存一周，在 - 5~-20℃下至少可保存一年。
    7. 台式离心机最大能达到 2,600×g 的离心力，如果将离心时间延长到 30-60 分钟可以满足步骤 2 和步骤 3 中的操作。

    RNA 抽提操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

    提示：
     
    用 TRIpure 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，所有的操作应该在 15-30℃的条件下。
     
    实验所需试剂但未提供的物品：
    1. 氯仿
    2. 异丙醇
    3. 75% 乙醇 (用 DEPC 处理过的水配制)
    4. 无 RNA 酶的水或 0.5% SDS 溶液 (调配无 RNA 酶的水 —— 将水加入无 RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1%(v/v)。放置过夜并高压灭菌。SDS 溶液必须用 DEPC 处理过并经高压灭菌的水配制)

    1. 匀浆化作用

    a. 组织
     
    用 glass 或强力匀浆器搅匀组织样品，每 50-100mg 组织加 1ml 的 TRIpure。匀浆化时组织样品容积不能超过 TRIpure 容积的 10%。
     
    b. 单层生长的细胞
     
    直接在直径 3.5 cm 的培养板中加入 1ml 的 TRIpure 溶解细胞，通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 TRIpure 量（每 10cm² 加 1ml）。当 TRIpure 量不足时可导致抽提的 RNA 中污染有 DNA。
     
    c. 悬浮生长的细胞
     
    通过离心来沉淀细胞。在 TRIpure 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每 5-10×10⁶的动物细胞，植物或酵母细胞或每 1×10⁷细菌加 1ml 的 TRIpure。在加入 TRIpure 前应避免洗涤细胞，因为那样会增加 mRNA 降解的可能性。破裂某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。
     
    可选方案：当样品富含蛋白质，脂肪，多糖或是细胞外物质例如肌肉，脂肪组织和植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在 2-8℃的条件下以 12,000×g 的离心力离心 10 分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞外膜，多糖，以及高分子量 DNA，而上层的超浮物含有 RNA。在来自于脂肪组织的样品中，大量的脂肪漂在最上层因而应该除掉。在每一个个案中，将清亮的匀浆液转移到一干净的试管中加入氯仿并继续进行下述的分离步骤。

    2. 分离阶段

    将匀浆样品在 15-30℃条件下孵育 5 分钟以使核蛋白体完全分解。1ml TRIpure 加 0.2ml 氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管 15 秒并将其在室温下孵育 2-3 分钟。在 2-8℃下以不超过 12,000×g 的离心力高速冷冻离心 15 分钟。离心后混合物分成三层：下层phenol - 氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA 无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加 TRIpure 容量的 60%。

    3. RNA 的沉淀

    将水样层转移到一干净的试管中，如果希望分离 DNA 和蛋白，有机层同样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀 RNA。最初均化时的每 1ml TRIpure 对应 0.5ml 异丙醇。将混合的样品在 15-30℃条件下孵育 10 分钟并在 2-8℃下以不超过 12,000×g 的离心力高速冷冻离心 10 分钟。RNA 沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。

    4. RNA 的漂洗

    移去上层悬液。用 75% 的乙醇洗涤 RNA 沉淀一次，每 1ml 的 TRIpure 至少加 1ml 的 75% 乙醇。旋涡振荡混合样品并在 2-8℃下以不超过 7,500×g 的离心力高速冷冻离心 5 分钟。

    5. RNA 的再溶解

    在操作的最后，简单干燥 RNA 沉淀（空气干燥或真空干燥 5-10 分钟）不要在真空管里离心干燥 RNA。尤为重要的是，不能让 RNA 沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的 RNA 样品其 A260/280 比值 < 1.6。用移液管尖分几次移取无 RNA 酶的水或 0.5% SDS 溶液来溶解 RNA（当 RNA 以后要用于酶切反应时，避免使用 SDS。）RNA 还能被 100% 甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在 - 70℃。



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      1.     Effect and Molecular Mechanism of DHA on Improving Rats Learning and Memory Ability. Food Science, 2012, online 2012-11-19

      2.     Differential expression of microRNAs in human keloids. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2012, 16(50): 9370-9375.

      3.     Study of Multidrug-resistance Reversing of Curcumin and Verapamil on Human Gastric Carcinoma SGC7901/ADR Cells.Vol.34,No.2,Apr.2012,pp.322-325

      4.     Effect of Sanguisorba tannins on the expression of MGMT gene and protein in myelosuppressed mice. TUMOR Vol. 33, September 2013

      5.     Zinc oxide nanoparticles inhibit Ca2+-ATPase expression in human lens epithelial cells under UVB irradiation. Toxicology in Vitro 27 (2013) 2117–2126

      6.     Effects of Du Meridian Electroacupuncture on Growth Associated Protein- 43 Expression in Rats after Spinal Cord Injury. Chin J Rehabil Theory Pract, Jan. 2014, Vol. 20, No.1.

      7.     Mycobacterium Bovis Ornithine Carbamoyltransferase,MB1684, Induces Proinflammatory Cytokine Gene. Expression by Activating NF-kB in Macrophages. ORIGINAL RESEARCH ARTICLE. DNA AND CELL BIOLOGY. Volume 33, Number 5, 2014ª Mary Ann Liebert, Inc.Pp. 1–9. DOI: 10.1089/dna.2013.2026.

      8.     A Novel Method of Total RNA Extraction from Leaves of.China Biotechnology,2013,33(5):107-111

      9.     The Response to High Magneto-Gravitational Environment of Different Differentiating-Stage Osteoblasts. Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(7):

      10.  Disrupted calcium homeostasis is involved in elevated zinc ion-induced photoreceptor cell death. Archives of Biochemistry and Biophysics 2014, 560: 44–51

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