TRAzol RNA提取裂解液 trizol R1021/R

TRAzol

产品组分

货号	规格（ml）
R1021	20
R1022	100

本产品可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取Total RNA。样品在RNAiso^TM Plus中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（下层），RNA分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到Total RNA。

试剂盒之外所需准备试剂

◆ 氯仿

◆ 异丙醇

◆ 75%乙醇（DEPC处理水配制）

◆ RNase-free水（制备方法：使用RNase-free的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC至终浓度0. 1%（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。）

保存和运输

1. 可以在室温下保存，建议在2-8℃下避光保存，效果更佳。

2. 可以在常温下运输。

实验操作

1. TRAzol的使用量情况如下。

样品量	TRAzol使用量（ml）
10 cm2的贴壁培养细胞	1
107的悬浮培养细胞	1～2
100 μl的白细胞	2
50～100 mg的普通组织样品	1
50～100 mg的特殊组织样品（肝、脾、骨及软骨等）	2
15～30 mg的植物材料（多糖和多酚含量不高的）	1

2. 实验样品的研磨和匀浆。

A. 贴壁培养细胞

① 倒出培养液，用1×PBS清洗一次。

② 每10 cm²生长的培养细胞中加入1 ml的TRAzol，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁

牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞）。

③ 将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。

④ 室温静置5分钟。

B. 悬浮培养细胞

① 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000 g 4℃离心2分钟，弃上清。

② 向每10⁷个细胞中加入l～2 ml的TRIzol。

③ 用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。 ④ 室温静置5分钟。

C. 动物组织、植物材料样品

① 将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果

没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量）。

② 对于普通的RNA提取样品，可以向研钵中加入适量的TRAzol，将研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂

解液呈透明状。

对于特殊样品，如肝、脾、骨及软骨等，可以将研磨成粉末状的样品加入到含有适量的TRAzol的匀浆管中，把匀浆管置于冰浴中进行匀浆，直至匀浆液呈

无颗粒透明状。

③ 将匀浆液转移至离心管中，室温静置5分钟。

④ 12,000 g 4℃离心5分钟。

⑤ 小心吸取上清液，移入新的离心管中（切勿吸取沉淀）。

3. Total RNA的提取。

① 向上述步骤2的匀浆裂解液中加入氯仿（TRAzol的1/5体积量），盖紧离心管盖，用力振荡（氯仿沸点低、易挥发，振荡时应小心离心管盖突然弹开）。待充分

乳化溶液呈乳白状（无分相现象）后，再室温静置5分钟。

② 12,000 g 4℃离心15分钟。

③ 从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：无色的上清液、中间的白色蛋白层及带有颜色的下层有机相。吸取上清液转移至另一新的离心管中

（切忌吸出白色中间层）。

④ 向上清中加入等体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，在15～30℃下静置10分钟。

⑤ 12,000 g 4℃离心10分钟。一般在离心后，试管底部会出现沉淀。

4. RNA沉淀的清洗。

小心弃去上清，缓慢地沿离心管壁加入75％的乙醇l ml（切勿触及沉淀），轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，12,000 g 4℃离心5分钟后小心弃去乙醇（为了更好

地控制RNA中的盐离子含量，应尽量除净乙醇）。

5. RNA的溶解。

室温干燥沉淀2～5分钟（不可以离心或加热干燥，否则RNA将会很难溶解，有关RNA溶解可以参考Troubleshooting中的相关说明），加入适量的RNase-free

水溶解沉淀，必要时可用移液枪轻轻吹打沉淀，待RNA沉淀完全溶解后于-80℃保存。