一站式平末端克隆试剂盒

特别提示：包括一站式平末端克隆试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一站式平末端克隆试剂盒
英文名称：One-Stop Blunt-ended Cloning Kit
产品货号：BTN131126
产品规格：20次

基因片段用Pfu等DNA聚合酶扩增得到的产物为平末端，直接克隆比较困难。做T/A克隆时，需要在其末端添加单个碱基A。本试剂盒提供了在平端添加单个A所需的所有试剂，大大方便后续的T/A克隆及序列分析。

产品特点：
1.适用范围包括：由高保真 DNA聚合酶如 Pfu、Pwo 、DeepVent等扩增而来的PCR产物；一些限制性内切酶如 EcoRV 、SmaI等酶切产生的DNA片段；粘端DNA用DNA聚合酶补平后的片段。
2.可以在任何平末端DNA片段两端分别补上单个脱氧腺嘌呤 A，间接将PCR产物克隆到T载体上。
3. 操作快速，5分钟就可以完成 。
 

成份	规格
ddH2O	1mL
平末端载体	20μl
10×克隆Buffer	0.5mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1.在离心管中加入下列溶液：

成份	用量
DNA Fragment	10ng
10× Cloning Buffer	5μL
平末端载体	1μL
ddH2O	up to 50μL

2. 72℃保温，5分钟。
3.产物回收或者 -20℃保存备用。

除了一站式平末端克隆试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN150801
规格：10*100μL
 BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，由特殊工艺制作，使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达10⁷cfu/μg。
 BL21 Star(DE3)菌株的特点是含有rne131基因突变体。rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而有效提高蛋白表达能力。本产品主要适用于T7启动子表达载体(如pET 系列)的高水平蛋白表达。
 菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、LB培养基等。

使用方法：
1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 取 100μL冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
3. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
4. 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
5. 取100μL左右菌液涂布于含相应抗生素的LB培养基上。如果转化高浓度的质粒，可以减少涂布的量。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

名称：pGL6-TA报告基因质粒
货号：YT443
规格：1μg
pGL6-TA报告基因质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到zuì低。


pGL6-TA主要用于在其多克隆位点插入特定的启动子、增强子等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。pGL6-TA和pGL6相比在多克隆位点和luc基因之间加入了一段minimal TA promoter，使luc基因的基础转录水平提高。

pGL6-TA质粒的主要信息如下：

Base pairs	5629
Multiple cloning region	1-59
Minimal TA promoter (pTA)	66-88
luc2 reporter gene	120-1782
SV40 late poly(A) signal	1817-2038
SV40 early enhancer/promoter	2086-2504
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region	2529-3323
Synthetic poly(A) signal	3348-3396
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3463-3482
ColE1-derived plasmid replication origin	3720
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4511-5371
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5476-5629
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5578-5597

pGL6-TA质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 用于插入调控序列：在多克隆位点选取适当的酶切位点，经酶切处理后连入适当的基因转录调控序列。pGL6-TA也可以用作报告基因检测时的阴性对照。
3. pGL6-TA质粒以及以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。

储存条件：-20℃。