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文献和实验问:新买了GelRed,比较贵,打算用节约的方法来使用,也就是把GelRed预混在上样缓冲液里,和样品混合后上样电泳。因此想请教一下有经验的站友: 1 假定使用6X上样缓冲液,应该以多大比例混合GelRed? 2 预混GelRed的上样缓冲液与核酸样品混合后,需要孵育一段时间还是可以直接上样? 3 预混在上样缓冲液中的GelRed是否稳定,是否可以长期存放,以及存放条件是室温,4度
一、实验目的 1 明确提取液的配制原理 2 通过对提取液的配制,掌握提取液中各 试剂 在提取中的作用。二、实验原理 DNA 是遗传物质, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基础。通常要求所提取的DNA 要有理想的纯度,足够完整,无断裂降解,提取过程尽量少使用有毒化学品等。为了达到上述要求,已报道了不少提取植物DNA 的方法,归纳起来,主要有CTAB 法、SDS法和碱提取法。DNA分子是分子
2. 次优样品分离。(A) 负载影响条带分辨率。 (B) 上样量过低会导致条带扭曲。 在上样缓冲液中准备好样品和分子量标准,其最终的体积通常占胶孔体积的 30%。由于孔底分布不均匀(图 2B),使用较少的上样体积会导致条带扭曲。对于含有 DNA 结合蛋白或粘性末端的样品,凝胶上样之前,混合物需加入至 含有 SDS 的上样染料中一同加热,因为蛋白质结合以及 DNA 片段之间的相互作用会导致分离效果不佳。 c .上样染料和缓冲液选择 制备凝胶电泳时,样品中添加了凝胶上样缓冲液 (通常是 6X 或 10
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