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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4°C保存
- 保质期:
半年
- 英文名:
Western Blocking Buffer
- 库存:
78
- 供应商:
深圳子科生物
- 规格:
60ml
WB封闭液(Western Blocking Buffer)可用于WB时转移了蛋白样品的NC膜或PVDF膜非特异性结合位点的封闭。封闭后,可以减少后续的一抗或二抗与膜的非特异性结合,降低背景着色,增强信噪比。
保存条件:4°C或-20°C保存,半年有效。
使用说明:临用前从-20°C冰箱中取出本产品,置室温待完全融化,颠倒混匀数次,置4°C保存备用,勿反复冻融。
完成转膜后,用WB洗涤液洗涤蛋白膜1-2分钟。加入WB封闭液,封闭60分钟,然后进行一抗孵育等后续操作。一次WB结束后,可以回收,4°C保存,用于下次的WB。欲了解详细的WB操作可以咨询我们在线客服。
大包装宜分装冻存,切忌反复冻融。
注意事项
1.本产品属蛋白制剂,室温放置过久易导致蛋白的降解和活性丧失。
2.反复冻融亦会导致蛋白活性的丧失。
3.本产品含防腐剂,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4.通常在室温封闭60分钟即可。如果对于一些抗体,背景非常高,可以在4°C封闭过夜。
NR2A (Glutamate receptor2A) 谷氨酸受体(N端抗原) 子科生物ZIKER
NRP-1(neuropilin-1) 神经纤毛蛋白-1(抗原) 子科生物ZIKER
NRP-2(neuropilin-2) 神经纤毛蛋白-2(抗原) 子科生物ZIKER
NSBP1(Nucleosome-binding protein 1) 核小体结合蛋白1(抗原) 子科生物ZIKER
NTP,Neurual thread protein 神经丝蛋白(抗原) 子科生物ZIKER
OAT-1 (Organic anion transporter 1)human 阴离子转运蛋白-1(人源) 子科生物ZIKER
OAT-1 (Organic anion transporter 1)mouse、rat 阴离子转运蛋白-1(大、小鼠同源:人源见ZIKER-0606P) 子科生物ZIKER
OAT-3(Organic anion transporter 3) 阴离子转运蛋白-3(抗原) 子科生物ZIKER
UAT (Urate transporter/channel) 尿酸盐转运子(抗原) 子科生物ZIKER
Oct-4 胚胎干细胞关键蛋白(多肽) 子科生物ZIKER
OPN(osteopontin) 骨桥蛋白(抗原) 子科生物ZIKER
P16/CDKN2A (Cyclin-dependent kinase inhibitor-2A) 抑癌基因p16(抗原) 子科生物ZIKER
p21/WAF1/CIP1 p21 核分裂抑制因子之一(抗原) 子科生物ZIKER
p27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B) p27(抗原) 子科生物ZIKER
P63 protein P63 肿瘤抑制基因(抗原) 子科生物ZIKER
OPG(Osteoprotegerin) 护骨素(多肽抗原) 子科生物ZIKER
OPGL (Osteoprotegerin ligand) 骨保护蛋白配体(抗原) 子科生物ZIKER
P311 protein 增生性瘢痕相关蛋白(抗原) 子科生物ZIKER
PARP(poly ADP-ribose polymerase) 多腺苷二磷酸多聚酶抗原 子科生物ZIKER
Visfatin-1 (PBEF1)(NT) Human 内脂素/内脏脂肪素(人:N端多肽)、内脏脂肪素、 又称:前B细胞克隆增强因子、内肥素、腹脂素 子科生物ZIKER
Visfatin-1 (PBEF1)(NT) hu、 mo、 rat、MK 内脂素/内脏脂肪素(人、大、小鼠、猴同源:N端多肽)、内脏脂肪素、前B细胞克隆增强因子、内肥素、腹脂素 子科生物ZIKER
Visfatin-2(CT)hu、mo、rat、MK 内脂素/内脏脂肪素(抗人、大、小鼠、猴:N端多肽)前B细胞克隆增强因子、内肥素、腹脂素 子科生物ZIKER
PEDF (pigment epithelium-derived factor) 色素上皮源性因子(多肽抗原) 子科生物ZIKER
PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 磷脂酸磷酸酶2C(抗原) 子科生物ZIKER
PEPT1 (Peptide-transporters 1) 肠道肽转运蛋白(小肽转运蛋白)多肽 子科生物ZIKER
PTEN/MMAC1 一种肿瘤抑制基因抗原 子科生物ZIKER
PIBF(progesterone induced blocking factor) 孕激素诱导阻断因子(抗原) 子科生物ZIKER
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文献和实验做了两个月的时间的 western blotting 终于出了比较好的结果。 老板让整理出protocol 这是写的PROTOCOL 大概会有很多错误请大家指正!谢谢先 WESTERN PROTOCOL A. Preparation of Samples 1. Get the heads of the fly 2. Stir them in the lysis buffer(4heads/10ul) 3. Add 2XSDS-gel-loading buffer
-cell Sure Lock Mini-cell (Invitrogen) 建议改进方向:转膜过程冰水浴,保持低温,Transfer Buffer重复使用。 蛋白来源:肾瘤细胞 蛋白分子量:39 kDa WB用膜类型、孔径:Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size (Invitrogen) 转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒压100 v 转膜时间:50 min 蛋白来源:MCF
封闭及杂交 在做杂交时,个人建议:还是使用杂交袋进行一抗和二抗的孵育,这样节约抗体。 操作开始: 1. 将膜用 TTBS 从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭 1 h。必要时可先用丽春红染色(2%乙酸,0.5%丽春红的水溶液)观察蛋白条带,再用去离子水和 TTBS 将丽春红洗脱后封闭,如用蛋白 marker 则可省略此步。 2. 将一抗用 PBST 稀释至适当浓度(在 1.5 ml 离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验
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