DNA提取液的配制
互联网
20972
一、实验目的
1 明确提取液的配制原理2 通过对提取液的配制，掌握提取液中各 试剂 在提取中的作用。
二、实验原理
DNA 是遗传物质, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基础。通常要求所提取的DNA 要有理想的纯度,足够完整,无断裂降解,提取过程尽量少使用有毒化学品等。为了达到上述要求,已报道了不少提取植物DNA 的方法,归纳起来,主要有CTAB 法、SDS法和碱提取法。DNA分子是分子生物学研究的基本材料, 依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。因此提取液里 试剂 的配比也有所不同：植物DNA的抽提常采用CTAB方法：
配方如下：
1 配制提取液之前，先配制母液。
母液（灭菌）：5M NaCl ( 58.4g加ddH 2 O制成200ml溶液)
0.5M Na 2 -EDTA(37.22g+ddH 2 O至200ml,用NaOH调pH值为8.0)
1M Tris-HCl(12.11gTris-HCl+ ddH 2 O至100ml,用浓盐酸调pH值至8.0)
2 提取液配方
100ml 加入：CTAB粉剂 2g
1M Tris(pH8.0) 10ml
0.5M EDTA(pH8.0) 4ml
5M NaCl 28ml
PVP 1g
β-巯基乙醇 1ml
加双蒸水定容至100ml
3 抽提液
分别量取苯酚、氯仿、异戊醇按25：24：1的体积比混合，再分别量取氯仿、异戊醇按24：1的体积比混合，配制成两种抽提液，各配制100ml
4 0.1xTE
1mlTris，20µl EDTA中加H 2 O, 用HCl调pH至8.0, 定溶，灭菌
三、实验器材
烧杯、量筒、容量瓶、玻璃棒、吸管、移液枪、 离心管 、冰箱、高压灭菌锅、电子天平、洗瓶
四、实验试剂
蒸馏
水、CTAB、NaCl、
EDTA
、
Tris
-HCl、β-巯基乙醇、0.1xTE、RNase酶、苯酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇
