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TaaI (HpyCH4III)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1361
  • 2025年10月07日
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    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : Tango™
    • - 孵育温度65°C
    • - 连接效率90%
    • - CpG甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 80°C加热20分钟不会使酶失活
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer Tango™
    ER1361 200 u (10 u/µl) 1.00 ml ER1361
    ER1362 1000 u (10 u/µl) 1.00 ml ER1362
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    Tango™ 65°C 0-20 0-20 0-20 50-100 100 100 1X or 2X

    Lambda DNA
    1.4%琼脂糖
    187 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液Tango™:
    33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
    65°C酶切。为确保高效酶切,反应体系中加入石蜡油防止蒸发。

    保存缓冲液
    TaaI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍TaaI过量酶切后,大约90%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    备注
    37°C酶切时只有10%的酶活性。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    Hpy188I。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 可能重叠 – 部分影响。
    EcoKI: 可能重叠 – 影响不确定。
    EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    CpG

    5'...Am5C G GT...3'
    3'...T Gm5C CA...5'

    部分影响
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    20-50 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    187 15 31 14 8 8
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    7 7 8 8 14 20

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