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Psp5II (PpuMI)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER0761
  • 2025年10月04日
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    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : G
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - Dcm甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活80°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer G 10X Buffer Tango™
    ER0761 500 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER0761
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    G 37°C 0-20 100 20-50 20-50 50-100 100 1X or 2X

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    3 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液G:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    Psp5II保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.15% Triton X-100, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍Psp5II过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    重叠的Dcm甲基化抑制Psp5II酶切。为了避免Dcm甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    Cfr13I, CpoI, Eco47I, SanDI。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
    CpG: 无重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...RGGWCm5CT GG ...3'
    3'...YCCWG GAm5CC ...5'

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    0 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    3 0 0 2 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 0 0 0 2

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