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- Thermo scientific -fermentas
- ER0821
- 2025年09月30日
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- 技术资料
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大量
|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer B | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0821 | 300 u (5 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0821 | |
| ER0822 | 1500 u (5 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0822 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| B | 37°C | 100 | 50-100 | 20-50 | 0-20 | 50-100 | 20-50 | 1X or 2X |
Lambda DNA (dam- )
1.4%琼脂糖
130 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液B：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
MboII保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
5倍MboII过量酶切后，超过80%的酶切产物可连接(连接体系：20-40 u T4 DNA连接酶/1 μg DNA，10% PEG)，超过80%的连接产物能重新酶切。
备注
- 底物为λ DNA (dam- ) (#SD0021)。
- 重叠的Dam甲基化抑制MboIII酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
- 超过15倍过量酶切会导致星活性。
- MboII切割后的DNA片段含有3’端单碱基突出，连接时比平末端困难。
- MboII可能会吸附在切割的DNA分子上，从而改变DNA条带的电泳纯移率。为了避免出现非正常条带，上样电泳前，建议采用6X Loading Dye & SDS溶液(#R1151)处理样本，或者在 DNA酶切产物中加入SDS并加热处理。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
甲基化影响
Dam: 可能重叠 – 阻止酶切。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | 5'...GAAGm6A TC ...3' |
阻止酶切 |
| CpG | 5'...m5C G AAGA...3' |
不阻止酶切 |
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...TGm6AAGA(N)5 TGCT...3' |
不阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 50-100 | ||||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 130 | 11 | 11 | 11 | 7 | 8 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 9 | 9 | 8 | 8 | 15 | 11 |
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