Esp3I (BsmBI)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER0451
  • 2025年09月27日
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      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : Tango™
    • - 需要DTT
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - CpG甲基化可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 重组酶
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer Tango™
    ER0451 200 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0451
    ER0452 1000 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0452
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    Tango™ 37°C 100 (+DTT) 20-50 (+DTT) 0-20 (+DTT) 0-20 (+DTT) 100 (+DDT) 0-20 (+DTT) 1X (+DDT)

    Lambda DNA
    1.0%琼脂糖
    14 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    [1X 缓冲液Tango™] + DTT:
    [33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA] + 1.0 mM DTT。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    Esp3I保存在:
    10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5 mg/ml BSA和50%�v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍Esp3I过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • 酶切需要添加DTT (#R0861/2),DTT需新鲜配制。
    • Esp3I在识别序列的下游切割,产生各种类型的DNA片段(5’-末端具有4 bp突出),该特点可用于PCR产物的克隆。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    CpG

    CGTCTC

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    14 0 1 1 2 2
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 0 0 1 2

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