CfrI (EaeI)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER0161
  • 2025年09月24日
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    16金牌会员
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      大量

    • - 推荐的缓冲液 : Tango™
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - Dcm甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - CpG甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 重组酶
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer Tango™
    ER0161 200 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0161
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    Tango™ 37°C 50-100* 50-100 0-20 0-20 100 0-20 1X

    Lambda DNA (dcm- )
    1.0%琼脂糖
    39 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液Tango™:
    33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    CfrI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 25°C), 500 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍CfrI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • 底物为λ DNA (dcm- ) (#SD0021)。
    • 重叠的Dcm甲基化抑制CfrI酶切。为了避免Dcm甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    Bsp120I, Eco52I, NotI。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
    CpG: 可能重叠 – 阻止酶切。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...YGGCm5CW GG ...3'
    3'...RCCG GWm5CC ...5'

    阻止酶切
    CpG

    5'...YGGCm5C G ...3'
    3'...RCCG Gm5C ...5'

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    0 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    39 2 3 6 3 3
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    3 3 4 4 4 8

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