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- Thermo scientific -fermentas
- FD0384
- 2025年09月19日
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|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X FastDigest® Buffer | 10X FastDigest® Green Buffer | ||||
| FD0384 | 200 µl (200 react.) | 1.00 ml | 1.00 ml | FD0384 | |
| Reaction temperature | Digestion time with 1µl of FastDigest® enzyme, min | bp from end of DNA required for complete digestion | Thermal inactivation | Incubation time without star activity, hours | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Lambda, 1µg/20µl | Plasmid DNA, 1µg/20µl | PCR product, ~0.2µg/30µl | Genomic DNA, 1µg/10µl | ||||
| 37°C | 5 | 5 | 5 | 5 | 2 | 65°C, 5 min | 16 |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
8 切割位点
1 µl FastDigest® AvaI Eco88I)可在
– 5分钟内酶切1 µg lambda DNA;
– 5分钟内酶切1 µg质粒DNA;
– 5分钟内酶切0.2 µg PCR扩增产物;
– 5分钟内酶切1 µg基因组DNA或30分钟内酶切5 µg基因组DNA。
C^TCGAG – FastDigest® SalI, FastDigest® XhoI, SalI, SmoI, XhoI。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | CYCGRG |
部分影响 |
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 8 | 1 | 2 | 1 | 1 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 1 | 1 | 2 | 2 | 2 | 1 |
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文献和实验Universal RiboClone® cDNA Synthesis System
Universal RiboClone ® cDNA Synthesis System The Universal RiboClone ® cDNA Synthesis System contains the reagents required for the synthesis of double-stranded cDNA from mRNA
Genomic Cloning Technical Manual
, 2) the genomic library constructed should be representative of genomic DNA sequences, and 3) the strategy should facilitate restriction mapping of the cloned DNA. Promega's preparations of LambdaGEM ® -11 and EMBL Vector Arms are optimized for the highest
扩增后保留为CGCG，BstU I能够识别并进行切割;若待测序列中，C未发生甲基化，则PCR后转变为TGTG，BstUI识别位点丢失，不能进行切割。这样酶切产物再经电泳分离、探针杂交、扫描定量后即可得出原样本中甲基化的比例。 这种方法相对简单，可快速定量几个已知CpG位点的甲基化，且需要的样本量少。然而，它只能获得特殊酶切位点的甲基化情况，因此检测阴性不能排除样品DNA中存在甲基化的可能。 4. 荧光定量法(Methylight) 此种方法利用TaqMan® 探针
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