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- Thermo scientific -fermentas
- ER0081
- 2025年11月07日
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大量
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer O | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0081 | 500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0081 | |
| ER0082 | 2500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0082 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| O | 37°C | 0-20 | 20-50 | 100 | 50-100 | 0-20 | 100 | 2X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
6 切割位点
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 8.2, 25°C), 200 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 部分影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | AGm6ATC T |
不阻止酶切 |
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...TGm6AGATCT(N)3 TGCT...3' |
部分影响 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 6 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
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文献和实验限制性酶切位点。3. ShRNA 插入片段中的茎环应当靠近寡核苷酸的中央。4. 5～6 个 T 必须放置在 ShRNA 插入片段尾部以确保 RNA 聚合酶 III 终止转录。5. 在正义链和反义链序列上不能出现连续 3 个或以上的 T。这可能导致 ShRNA 转录的提前终止。下面以 pSUPER 质粒载体设计 ShRNA 为例：1. 选择双酶切位点分别是 BglII-HindIII site。2. pSUPER ShRNA design model：红色部分包含限制性酶切位点，绿色部分为茎环序列。3. shRNA 的引物
几个小技巧： 1：在做多个同类酶切反应预混液时，水要多加1-5微升(当然不能超过预混液总体积的5%)，以防止最后一管酶液不够的尴尬局面. 2:记住所用酶的特性，不光体现BUFFER的选择上。也体现记住不同限制酶稳定性上。比如BamHI5小时内稳定（37度），而BglII16小时内都保留100%的活性；那么在用酶时，如果能反应16小时，就可以采用BamHI : BglII = 2:1的用量了(为了省钱). 3：如果反应较长时间而酶切体系又很小比如10微升，那么哪怕用PCR小管做
Determining the Direction of Replication Fork Movement
, with the enzyme of choice in various brands of agarose. The enzymes that cut to completion in Beckman LE agarose are AvaI, Bam HI, BglII, EcoRV, NcoI, PstI, PvuII, SacII, SnaBI, SpeI, StuI, XbaI and XhoI. (There are likely to be many others that also cut
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