说明
TrueStart™ Hot Start
Taq DNA Polymerase设计用于热启动PCR。该技术可增加DNA扩增的特异性、敏感性和产量(1-5)。TrueStart™ Hot Start
Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的重组
Taq DNA polymerase,蛋白分子的氨基酸残基上增加了热不稳定的封闭基团。该酶在室温下没有活性,避免形成引物二聚体和非特异性延伸。TrueStart™ Hot Start
Taq DNA Polymerase在PCR的起始变性步骤快速活化。
无需额外的活化过程是该酶与其它热启动DNA polymerases 的重要区别,非常适合自动热启动PCR 和快速PCR。活化的TrueStart™ Hot Start Taq DNA Polymerase催化5’=>3’方向合成DNA、无可检测的3’=>5’ 校正外切酶活性、具有较低的5’=>3’ 外切酶活性。酶活化前检测不到这些活性。
分子量
94 kDa,单体。
活性单位定义
1 个活性单位是指在74°C,30分钟内将10 nmol脱氧核糖核苷酸合成掺入多聚核苷酸(吸附在DE-81上)所需的酶量。
酶活性分析混合物:25 mM TAPS (pH 9.3, 25°C), 50 mM KCl, 2 mM MgCl2, 0.2 mM各种dATP, dGTP, dTTP, 0.1 mM dCTP, 0.75 mM活化的鲑鱼精DNA, 0.4 MBq/ml [3H]-dCTP。
保存缓冲液
保存缓冲液组分:
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Tween 20, 0.5% (v/v) Nonidet P40和50% (v/v)甘油。
10X TrueStart™ Taq Buffer
200 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 200 mM KCl, 50 mM (NH4)2SO4。
质量控制
相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试:PCR。
抑制与失活
- 抑制剂:阴离子去污剂(脱氧胆酸、肌氨酰和SDS的浓度分别高于0.06、0.02和0.01%时)(5)。
- 失活:酚/氯仿抽提。
图1。TrueStart™ Hot Start Taq DNA Polymerase与其它商业化热启动Hot Start PCR系统扩增复杂模板的特异性比较。
根据厂家的使用推荐,扩增人beta-globine基因(2 kb DNA片段)。
M – GeneRuler™100 bp Plus DNA Ladder
1-2 – TrueStart™ Hot Start Taq DNA Polymerase
3-4 – Taq DNA Polymerase (化学修饰), 厂家A
5-6 – Taq DNA Polymerase (温度依赖性抑制剂), 厂家B
7-8 – Taq DNA Polymerase (抗体原理), 厂家C
9-10 – Taq DNA Polymerase (非热启动), Fermentas