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- Thermo scientific -fermentas
- K0241
- 2025年10月24日
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- 文献和实验
- 技术资料
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| Water, nuclease-free | ||||
| K0241 | 2 x 1.25 ml (for 200 react. of 25 µl) | 2 x 1.25 ml | K0241 | |
| K0242 | 10 x 1.25 ml (for 1000 react. of 25 µl) | 10 x 1.25 ml | K0242 |
- Features
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- 特异性 一 Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase和优化的缓冲液可以防止非特异性扩增和形成引物二聚体。
- 敏感性 一 可检测低拷贝模板。
- 荧光素 – 配套提供荧光素阴性参考染料，适用于Bio-Rad的iCycler iQ®、MyiQ™和iQ5™定量PCR仪。
- 线性范围广 一 可精确定量9个数量级。
- 可重复性、使用方便 一 即用型2X Mix，减少加样错误和反应体系配制时间。
- Applications
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- 实时PCR和RT-qPCR，采用SYBR® Green染料，使用Bio-Rad iCycler iQ®、MyiQ™和iQ5™定量PCR仪。
Maxima® Hot Start Taq DNA polymerase与优化的PCR缓冲液配合使用可确保PCR扩增的特异性和灵敏性。SYBR® Green I染料可以插入合成的DNA导致荧光产生，因此无需使用序列特异性探针。该Master mix中的荧光素可以收集使用Bio-Rad公司iCycler iQ®、MyiQ™或iQ5™定量PCR仪的动态孔参数，且不会影响qPCR效率。Bio-Rad iCycler iQ®, MyiQ™ or iQ5™ machines, but does not affect qPCR efficiency.混合物中含有dUTP，与uracil-DNA glycosylase (UDG)配合使用可防止携带污染。
Maxima® SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2X)介导的实时PCR确保高重复性、高灵敏度和特异性定量基因组、质粒、病毒和cDNA模板。
扩增10倍梯度稀释的超螺旋质粒DNA，模板用量从10 ng至0.1 fg不等，采用Maxima® SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2X)。设置重复对照试验。使用的仪器为Bio-Rad公司的iCycler iQ®定量PCR仪。扩增曲线表明在9个数量级范围内呈线性。
扩增10倍梯度稀释的超螺旋质粒DNA，模板用量从10 ng至0.1 fg不等，采用Maxima® SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2X)。设置重复对照试验。使用的仪器为Bio-Rad公司的iCycler iQ®定量PCR仪。NTC = 非模板对照。
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文献和实验几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
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