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- Thermo scientific -fermentas
- K0221
- 2025年10月11日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| Water, nuclease-free | ||||
| K0221 | 2 x 1.25 ml (for 200 react. of 25 µl) | 2 x 1.25 ml | K0221 | |
| K0222 | 10 x 1.25 ml (for 1000 react. of 25 µl) | 10 x 1.25 ml | K0222 | |
| K0223 | 4 x 12.5 ml (for 4000 react. of 25 µl) | 2 x 30.00 ml | K0223 |
- Features
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- 特异性 一 Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase和优化的缓冲液可以防止非特异性扩增和形成引物二聚体。
- 敏感性 一 可检测低拷贝模板。
- ROX – 提供ROX参考染料。
- 线性范围广 一 可精确定量9个数量级。
- 通用 一 与几乎所有的热循环仪兼容。
- 可重复性、使用方便 一 即用型2X Mix，减少加样错误和反应体系配制时间。
- Applications
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- 实时PCR，使用SYBR Green染料。
- 实时RT-PCR，使用SYBR Green染料。
Maxima® Hot Start Taq DNA Polymerase与配套的优化缓冲液可确保PCR 的特异性和灵敏度。该Master Mix 中还含有dUTP，与Uracil DNA glycosylase (UDG) 配合使用可以防止携带污染。SYBR Green插入染料无需序列特异性探针即可检测DNA。ROX为内参荧光染料。
Maxima® SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (2X) 在荧光定量PCR中的应用可以确保基因组、质粒、病毒DNA和cDNA模板定量的重复性、特异性和敏感性。该产品与绝大多数厂商的实时热循环仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Corbett、Bio-Rad 和Roche。
Maxima® SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (2X)扩增10倍梯度稀释的超螺旋质粒DNA (10 ng - 0.1 fg)。每个扩增反应设置一个平行实验。热循环仪为Eppendorf 公司的Mastercycler® ep realplex instrument。扩增曲线和标准曲线在9个数量级范围内呈线性。NTC为非模板对照。
Maxima® SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (2X) 扩增10倍梯度稀释的超螺旋质粒DNA (10 ng - 0.1 fg)。每个扩增反应设置平行实验。热循环仪为Eppendorf 公司的Mastercycler® ep realplex instrument。扩增曲线和标准曲线在9个数量级范围内呈线性。NTC为非模板对照。
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文献和实验PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
%，避免引物内含有互补序列，3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段，真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时，首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX（High 还是 Low）！试剂买回来，样也加好了，最后发现不能用在自家仪器上，内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择，如果不想这么麻烦，ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix （Q711）那是极好
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