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Ppu21I (BsaAI)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1971
  • 2025年11月03日
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      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : Unique缓冲液
    • - 孵育温度30°C
    • - 连接效率90%
    • - CpG甲基化可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer Ppu21I
    ER1971 500 u (10 u/µl) 1.00 ml ER1971
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    Ppu21I 30°C 50-100* 100* 20-50 NR NR NR NR
    * –星活性比5倍过量酶切(5 units x 1 hour)还强。

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    14 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液Ppu21I:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.2, 37°C), 3 mM MgCl2 , 150 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
    30°C酶切。

    保存缓冲液
    Ppu21I保存在:
    10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍Ppu21I过量酶切后,超过90%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • 37°C酶切时只有不到30%的酶活性。
    • 低盐、pH> 8.0、高浓度甘油(>5%)或过量酶切都会导致星活性。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。
    EcoKI: 可能重叠 – 影响不确定。
    EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    CpG

    YACGTR

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    14 2 5 1 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    1 1 1 1 0 2

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