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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Coomassie Blue Fast Destaining Solution
- 库存:
100
- 供应商:
上海万生昊天生物技术有限公司
- 规格:
500ml
考马斯亮蓝脱色液(Commassie Blue Destaining solution)是用于蛋白凝胶考马斯亮蓝染色后脱色的溶液。采用常规脱色方法至少脱色1h可以观察到蛋白条带,采用快速脱色方法不足30min内即可观察到蛋白条带。观察到最清晰的蛋白条带则需脱色更长时间。
保存条件:室温保存,12个月有效。
注意事项:
1. 染色时,如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。
2、脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
3、如果希望染色的背景更低,希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更低,条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果,获得更好的考染蛋白条带。
4、微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的乙酸的挥发,最好能在通风橱中进行。
5、本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
(一)常规染色脱色方法
1、凝胶染色后倒出染色液。染色液可以回收重复使用2~3次。
2、加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
3、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4~24h。期间更换脱色液2~4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1~2h后即可出现。
4、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。
(二)快速染色脱色方法
1、凝胶染色后倒出染色液。染色液可以回收重复使用2~3次。
2、加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
3、微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
4、随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5~10min。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
5、 更换新鲜的脱色液,重复步骤3和步骤4,直至蓝色背景基本上全部被脱去,蛋白条带染色效果达到预期。
6、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。
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文献和实验液(脱色液I加入0.25%考马斯亮蓝R―250)的容器内,脱色摇床染色2h或过夜。②弃去染色液,将凝胶在脱色液I(乙醇:冰乙酸:水=25:8:65)中继续在摇床上震荡脱色。为脱色完全,需数次更换脱色液I。③当凝胶上的斑点清晰、凝胶背景较浅时,倒去脱色液I,加入脱色液Ⅱ,凝胶置于脱色液Ⅱ(乙醇:冰乙酸:水=10:15:175)中保存。 (2)快速银染的主要步骤:45%乙醇+5%乙酸固定60min,水洗每次45min,共2次。用0.02%Na2 S2 03 敏化l~2min,水洗每次1min
一. 实验原理SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。二. 试剂和器材试剂:1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH
ml,溴酚蓝0.5g,SDS l0g,溶于水,用HCI调PH至8.0,定容至500ml。( 11)脱色液 甲醇:乙酸:水=5:1 :5(体积比)( 12)染色液(0.25%考马斯亮蓝R250)1.00g考马斯亮蓝R250,用脱色液400ml溶解,过滤备用。( 13)低分子质量标准蛋白溶液,包括溶菌酶(MW=14400Da)大豆胰蛋白酶抑制剂(215000)、碳酸酐酶(310000)、卵白蛋白(450000)、牛血清白蛋白 (662000)、磷酸化酶B (925000)。用样品缓冲液配成2mg/ml
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