- ￥1250
- 达领生物
- DLV101
- 2026年04月25日
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- 文献和实验
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规格：50次
产品介绍
本产品利用Vaccinia topoisomerase I 能在瞬间完成连接反应的特性，可快速完成拓扑连接反应。本产品包含pClone007载体、拓扑异构酶及优化的缓冲液，大幅简化加样流程，5 min即可完成连接反应，主要适用于平末端TA克隆。
产品应用
本产品适用于≤5000 bp的平末端TA克隆。
产品特点
• 5 分钟快速连接；
• 低背景，阳性率可达95%；
• 无需蓝白斑筛选；
• 平末端片段直接连接，无需加A；
• 预混Mix，大幅简化加样流程。
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文献和实验PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含
，能够以模版为准切掉错配的碱基，因而得到的PCR产物多数是平末端，不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点，单酶切得到平末端的线性片断，直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒，不过较少用。平末端的连接效率低，通常需要高浓度的连接酶，较长的连接时间，合适的片断：载体比例，有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇（PEG2000），以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒
℃，而拓扑异构酶I则偏爱室温。这个室温是指22-23℃，应特别注意。很多时候我们实验室的室内温度并不满足条件。TOPO克隆得到的菌落可能不如TA克隆多，不过质量高，95%左右都是重组子。价格约为5748元/20次，时间就是金钱，这下体会到了吧。 如果你用的是高保真酶，你可以选择在PCR之后加A，或者你直接选择平端克隆试剂盒。由于载体会自连，所以平末端克隆的背景会很高。为了避免这个问题，Invitrogen开发了Zero Background(零背景)技术，用在TOPO载体上。这个技术
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