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- 天根生化科技（北京）
- 中国
- VT203-01
- 2025年08月24日
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天根生化科技（北京）
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20 ul
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文献和实验相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
目前市场上常见的TA克隆试剂盒，根据连接方法可以分成两种：方法1：以T4连接酶进行连接的方法，这两种方法转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，一般快速连接方法需要半个小时到一个小时；达到最佳的效果，要过夜连接。方法2：以拓扑异构酶（TOPO）进行连接的方法，这种方法的优势是快速连接，在5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中，阳性率比较高，这种方法国内也有人模仿。这种方法虽然速度快，但是也有一些缺陷，比如长片段连接效率不如T4连接酶，转化子少
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
连接酶，反应10分钟。平滑末端连接：在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA 连接酶反应2小时，或者加入1µl高浓度T4 DNA 连接酶反应10分钟。 另外，NEB的快速连接试剂盒 (Quick Ligation Kit, NEB #M2200V [15个反应])是独有的可以在室温5分钟条件下连接平滑末端和粘性末端的试剂盒。 图1：在25°C条件下，用1 unit（1:400稀释后取1 µl）T4 DNA连接酶连接λDNA/Hind Ⅲ片段(4-碱基粘端)不同反应时间的结果。 图
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