红色荧光细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒

红色荧光细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

红色荧光细胞繁殖与毒性定量检测试剂是一种旨在通过使用红色荧光染料自由进入活细胞，在细胞内多种氧化还原酶的作用下，由非荧光性染料转长生高度红色荧光信号，来定量测定活体细胞繁殖的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种贴壁或悬浮生长中的动物或人体细胞。替代传统的同位素[³H]-thymidine检测的最佳选择。产品严格无菌，即到即用，简捷敏感，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

作为细胞染色剂之一的荧光染料刃天青或树脂天青（7-羟基吩噁嗪酮；resazurin；resazoin），又称AlamaBlue，是一种氧化还原指示剂，即在氧化状态下，呈现紫蓝色，而在还原状态下，呈现粉红或红色。在细胞内多种还原酶或化学还原作用下，染料由非荧光性转变为高度红色荧光的试卤灵（3,7-二羟基吩噁嗪；resorufin），所产生荧光的吸收峰是530至560nm，而散射峰是590nm。

产品内容

染色液（Reagent A） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent A）在4℃冰箱里，避免光照；有效保证6月

用户自备

荧光酶标仪：用于定量检测染色后的荧光细胞
分光光度酶标仪：用于定量检测染色后的细胞

实验步骤

1. 准备96孔细胞培养板的待测细胞（药物处理的目标细胞）和标准细胞（作为标准曲线的构建）

标准贴壁细胞数的设置：0，100，1000，5000，10000；
标准悬浮细胞数的设置：0，2000，20000，200000，500000

2. 到规定的检测时间点，从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
3. 小心加入xx微升染色液（Reagent A）到含有200微升细胞培养液的96孔板中每一个孔里
4. 放进37℃细胞培养箱里，孵育2小时（注意：可以孵育4至24小时）
5. 即刻放进荧光酶标仪里测读：滤波器激发波长560nm，散发波长590nm，闪烁次数10，间隔时间0.5秒――记录相对荧光单位（RFU）
6. 或放进分光光度酶标仪里测读：滤波器波长570nm，参考波长600nm――实际吸光读数＝OD570－OD600
7. 绘制标准曲线或细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位（RFU）或实际吸光读数；横坐标（X轴）为细胞数或时间点或药物浓度
8. 放回37℃，5%CO2细胞培养箱里继续培养

注意事项

1. 本产品为500次（5个96孔细胞培养板）操作
2. 染色液（Reagent A）可以自由进入细胞
3. 操作时须戴手套
4. 整个操作须无菌操作
5. 建议96孔板里的贴壁细胞量在100至10000范围为理想状态
6. 建议96孔板里的悬浮细胞量在2000至500000范围为理想状态
7. 建议起始贴壁细胞数为1000为理想状态，而起始悬浮细胞数为20000为理想状态；用户可以根据需求确定起始细胞数
8. 孵育时，须避光
9. 建议使用无酚红的培养基为佳，尤其采用分光光度仪检测
10. 细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失的氢二羟基吩噁嗪（hydroresorufin）
11. 本产品可以使用荧光或分光光度检测
12. 如果用户没有匹配的荧光波长，可以使用激发波长530nm至560nm，散发波长580nm至620nm之间的任一波长替代
13. 本产品可以与其它绿色荧光检测同步检测
14. 本公司提供系列细胞繁殖检测试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光显著

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。