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- 2025年07月15日
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鼎国昌盛
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25T
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文献和实验请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分？
各位老师： 您们好！偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因，并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A)，得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
，12,000 g离心2 min。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心2 min。 【结果】 DNA Marker, DL5000 (TSJ012-100/500)；样品1-5：全血样本。 【数据来源】 青岛大学附属医院马老师 【来自老师的评语】 以前我们用过其他公司专门提取血液基因组的是试剂盒，血液用量比较大，效果也一般，胶图背景脏；擎科这款动物基因组提取试剂盒属于通用型的，可以一盒多用这点是非常不错的，而且提取的时候血液用量少，提取效果也能满足我后续的实验要求，挺
之外，ABI的试剂的各方面的条件也是摸索优化好了的，基本上只要不出大的问题——比如说 仪器 出错，样品制备得太差——ABI的这些试剂都可以得到不错的结果。但是缺点就是贵（200个反应4500），以及时间周期比较长，不过如果你希望能发到高点数的文章，这些时间金钱可能还是省不了的。 在ABI的这些试剂盒中一般都包括AmpliTaq或者AmpErase金牌酶（具体见定量PCR:“酶”头一蹙，计上心来 Qiagen vs.ABI(1)），缓冲液，对照等，另外如果是RT-PCR试剂盒
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