- ￥2810
- prospec
- 1009-04
- 以色列
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
2DGel flatbed 15% NF
- 供应商：
北京鼎国昌盛
- 库存：
大量
- 规格：
5
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文献和实验过程是第一天seeding,第二天换low serun的opti-MEM加lipofactamin,Renilla,和我的质粒过夜。第三天加compound,incubate一个小时以后加PMA,PHA，在incubate6个小时以后测量。Empty vector的读数和NF-kB的读数差很远，我想Transfection还是成功的。但是加了PMA和PHA的和不加的读数几乎没有区别。加了compound的和不加的也没有区别。 raw ratio 都在15左右。请高手赐教，不胜
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
核蛋白提取： （1）5 millions个离心收集 （2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。 （3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。 （4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。 （5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 （6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10分钟
下沙 各位战友，关于NF-kB的激活，我查了一些资料，有人认为通过western研究P65的表达量可以反映NF-kB的激活。因为P65的磷酸化和IkB的磷酸化可以反映NF-kB的激活，我比较困惑的是到底采用western检测P65、磷酸化P65还是IkB呢？是检测胞浆中的蛋白吗？如果是检测P65，NF-kB激活时，P65是升高还是降低呢？谢谢！ magichunter 1、提取细胞全蛋白，然后测定磷酸化的P65表达，如果表达
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