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- 2025年12月02日
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生物素标记的蛋白标准，主要用于化学发光法，配合提供的streptavidin-HRP使用，可以方便地在化学发光法检测样品蛋白的同时，也可以检测到相应的分子量标准。分子量标准和目的条带一次性显示在同一胶片上，可以更直观地判断目的蛋白大小，利于分析。生物素标记的蛋白标准用于HRP（辣根过氧化物酶）Western blot中的蛋白质分子量检测。蛋白质分子量为结合有生物素的纯化蛋白混合物，蛋白标准跨度较大――从6.5KDa到180KDa 之间的九个条带，用于免疫印迹化学发光的检测条件已经得到优化。蛋白质标准包括9种工程蛋白，分子量范围在6.5－180KDa之间，分别是180KDa的a2－巨球蛋白，116KDa的β－半乳糖苷酶；97KDa的磷酸化酶；58.1KDa的过氧化氢酶；39.8KDa的醇脱氧酶；29KDa的碳酸酐酶；20.1KDa的大豆胰蛋白酶抑制剂；14.3KDa的溶菌酶；6.5KDa的抑肽酶。
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文献和实验(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率.缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力.购买信息:中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)V5235S200μg国产80元分子量大小:（14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD）中范围蛋白质分子量标准(24
转印夹，注意 PVDF 膜与胶，PVDF 膜与滤纸，滤纸与胶之间不可有气泡。 2） 转印槽加满转膜缓冲液，插入电转印夹，将转印槽放入冰水中，确保 PVDF 膜靠近正极，带负电的氨基酸和蛋白质向正极迁移。 3） 转膜选择恒流，每个转印槽建议电流为 150-300 mA，时间依据目的蛋白条带分子量大小做适当调整。 4） 转膜结束后，将 PVDF 膜置于丽春红染色液中，室温 5-10 分钟即可见红色条带，用洗涤缓冲液洗数次可洗掉红色条带进行后续实验 。 封闭 1） 漂洗印迹膜：使用洗涤缓冲液室温适当漂洗
。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜 ）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。其图解为： Western Blot显色的方法主要有以下几种： i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv
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