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- 技术资料
- 保存条件:
室温及-20℃
- 规格:
50T
产品名称:植物基因组DNA提取试剂盒
产品概述:本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取多种植物组织中的基因组DNA。植物组织材料经液氮研磨后,加入裂解液释放基因组 DNA 再结合 DNA 制备膜技术纯化基因组 DNA,提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建 、Southern杂交等实验。
注意事项
1. 若缓冲液LP1或LP2有沉淀析出,可在37℃水浴溶解,摇匀后使用。
2. 所有离心步骤均为室温下离心。
操作流程:
使用前请先在漂洗液PW中加入60ml无水乙醇 。
1. 处理材料:取植物新鲜组织100mg或干重组织20mg , 加入液氮充分碾磨。加入500μl缓冲液LP1和6μl RNase A(10 mg/ml) , 旋涡振荡1min , 室温放置10min。
2. 加入130μl缓冲液LP2 , 充分混匀 , 旋涡振荡1min。
3. 12,000 rpm离心5min , 将上清移至新的离心管中。
4. 加入1.5倍体积的缓冲液LP3(例如500μl的上清液加750μl缓冲液LP3) , 立即充分振荡混匀15s , 此时可能会出现絮状沉淀。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中) , 12,000 rpm离心30s , 倒掉废液 , 吸附柱AC放入收集管中。(注:如果溶液较多,需要分两次过柱,每次过柱体积不得超过700μl。)
6. 向吸附柱AC中加入600μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇) , 12,000rpm离心30s,倒掉废液 , 将吸附柱AC放入收集管中。注意:如果吸附柱膜呈现绿色 , 向吸附柱CB3中加入500μl 无水乙醇 , 12,000rpm离心30s , 倒掉废液 , 将吸附柱AC放入收集管中。
7. 重复操作步骤6。
8. 将吸附柱AC放回收集管中 , 12,000rpm离心2min , 倒掉废液。将吸附柱AC置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9. 将吸附柱AC转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE(加热至65℃时使用有 利于提高洗脱效率),室温放置2-5 min,12,000rpm离心2min,将溶液收集到离心管中。注意:为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱AC中,室温放置2min,离心2min。
DNA浓度及纯度检测
1. 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2. DNA应在OD260处有显著吸收峰 , OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
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文献和实验以下操作按照天根产品 DP321 快捷型植物基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 植物叶片2. 研钵 液氮3. 移液器及配套无菌枪头(200 μl ,1ml),1.5 ml离心管4. 异丙醇,70%乙醇,干净吸水纸5. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机本文版权归天根生化科技(北京)有限公司所有,仅供个人学习使用,请勿转载
细菌基因组 DNA提取试剂盒操作指南 (DP302)——细菌
以下操作按照天根产品 DP302 细菌基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。 实验准备: 1. 培养菌液1-5ml (本实验以革兰氏阴性菌为例,革兰氏阳性菌前处理详见说明书) 2. 移液器及配套无菌枪头(200 μl ,1ml) 1.5 ml 离心管 3. 无水乙醇 4. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机 实验准备-试剂盒准备 使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇,加入体积请
,加入适量的灭菌ddH2 O或TE溶解DNA。9 电泳检测完整性。三、结果分析 1. 用紫外分光光度计在230nm、260nm、 280nm和310nm波长分别读数。其中260nm用琼脂糖凝胶电泳(0.8%)检测核DNA的完整性(见图2 )。 完整性好的基因组DNA应是一条比23Kb滞后的电泳带, 若降解则成为弥散状。 电泳前缘为未除干净的RNA。 2.如果DNA沉淀呈白色透明状而且溶解后成粘稠状,说明DNA含有较多的多糖类物质,可以在取材前将植物放暗处24hr,以达到去除淀粉的目的
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