注意事项:
1. 基因组DNA需长期保存时 , 建议用洗脱缓冲液EB溶出。
2. 如果发生吸附柱堵塞现象可提高离心力至15000rpm,并适当延长离心时间。
3. 如果细胞裂解后过于黏稠,可再添加一次相同体积的溶液GL、Proteinase K 和RNase A,继续裂解。
该产品被引用文献(仅展示部分):
1、Gu J; Wang L; Li T, et al., Role and mechanism of organic cation transporter 3 in oxaliplatin treatment of colon cancer in vitro and in vivo. Oncol Rep 2019.
PubMed: 31524264
2、He Y; Yu H; Ge Y, et al., Bacterial beta-glucuronidase alleviates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice: A possible crucial new diagnostic and therapeutic target for inflammatory bowel disease. Biochem Biophys Res Commun 2019, 513 (2), 426-433.
PubMed: 30967260
3、Liu P; Li Y; Liu D, et al., Tolfenamic Acid Attenuates 3-Nitropropionic Acid-Induced Biochemical Alteration in Mice. Neurochem Res 2018, 43 (10), 1938-1946.
PubMed: 30120653
操作流程:
实验前的准备
1. 准备56°C水浴。
2. 溶液GL若出现沉淀,请于65°C加热溶解,待恢复至室温后使用。
3. 漂洗液WB在首次使用前,请添加56ml的100%乙醇(50T),混合均匀。
4. 洗脱结合于DNA制备膜上的基因组DNA时,将洗脱液或灭菌蒸馏水加热至65°C使用会提高基因组DNA的洗脱效率。
操作步骤
1. 取2-25mg 组织,置于 2ml 离心管中,用剪刀尽可能地剪成碎块,对于一些质地坚硬的组织也可以进行液氮研磨。
2. 加入180µl的溶液GL、20µl的Proteinase K 和10µl的RNase A,充分吸打混匀 , 于56°C水浴温浴至组织完全裂解,大概需要2-3h,温浴时可时常将样品取出进行震荡以加速裂解。
3. 加入200µl的溶液GB和200µl100%乙醇,充分吸打混匀。
4. 将吸附柱安置于收集管上 , 溶液移至吸附柱中 , 12000rpm离心2min,弃滤液。
5. 将500µl的漂洗液WA加入至吸附柱中,12000rpm离心1min,弃滤液。
6. 将700µl的漂洗液WB加入至吸附柱中,12000rpm离心1min,弃滤液。(注:请确认漂洗液WB中已经加入指定体积的100%乙醇。请沿吸附柱管壁四周加入漂洗液WB , 这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐分。)
7. 重复操作步骤6。
8. 将吸附柱安置于收集管上,12000rpm离心2min。
9. 将吸附柱安置于新的1.5ml的离心管上,在吸附柱膜的中央处加入50-200µl的灭菌水或洗脱缓冲液EB,室温静置5min。(注:将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液EB加热至65°C使用时有利于提高洗脱效率。)
10. 12000rpm离心2min洗脱DNA,如需获得更大收量可将离下液重新加入吸附柱膜的中央或再加入50-200µl的灭菌水或洗脱缓冲液EB,室温静置5min后12000rpm离心2min洗脱DNA。
11. 基因组DNA定量。提取到的基因组DNA可通过电泳或吸光度测定以定量。